请教 保健食品中总皂甙的测定

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请问有人做过保健食品中总皂甙的测定吗？，我用这个方法测人参总皂甙，误差很大，不知哪个步骤出问题了，谁做的的可以介绍下经验吗？
附：保健食品中总皂甙的测定
1、        试样处理
1.1 固体试样：称取1.000g左右的试样，置于100ml容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100ml，摇匀，放置，吸取上清液1.0ml进行柱层析。
1.2 人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品0.020g，用甲醇溶解并稀释至10ml，即每毫升含人参皂苷Re2.0mg。
2、柱层析：
   用10ml注射器作层析管。内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂。上加1cm中性氧化铝。先用25ml70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0ml已处理好的试样溶液，用25ml水洗柱，弃去洗脱液，用25ml70%乙醇洗脱人参皂苷，首席洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。
3、显色
   在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2ml2%香草醛冰醋酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8ml高氯酸，混匀后移入5ml带塞刻度离心管中，60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0ml，摇匀后，以1cm比色池560nm波长处与标准管一起进行比色测定。
4、标准管
   吸取人参皂苷Re标准溶液(2.0mg/ml)100ul放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），以下操作从“3.2柱层析…”起，与试液相同，测定吸光度值。

毒手药王邓智先

保健食品功效成分及卫生指标检验规范(2003年版)第二部分 检验方法(二十三)
CHP 2005 第一部红参项下RADIX ET RHIZOMA GINSENG RUBRA
CHP 2005 第一部人参项下RADIX ET RHIZOMA GINSENG
CP 2005 第一部西洋参项下RADIX PANACIS QUINQUEFOLII
NY/T 316-1997 西洋参制品American ginseng products
NY/T 318-1997 人参制品  Ginseng products
NY/T 316-1997 西洋参制品American ginseng products



保健食品中人参总皂苷的含量测定方法研究

发表时间：2014-8-26   来源：《医药前沿》2014年第20期供稿  作者：张高飞 于玥 邬晓鸥 李军




[导读] 本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。



张高飞  于玥  邬晓鸥  李军
         (深圳市药品检验所  518057)
         【摘要】目的 建立保健食品中人参总皂苷含量的测定方法。方法 用水提取人参总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的人参皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛反应，产生特征的紫红色，在560nm下测定吸光度。结果 人参总皂苷在0.0722～0.2165mg质量范围内与吸光度线呈良好的线性关系，平均回收率为95.9%。结论 本文建立的方法简单、便捷，准确性、重复性好，可用于保健食品中人参总皂苷的含量测定。
         【关键词】 保健食品  人参总皂苷  分光光度法
         【中图分类号】R93                      【文献标识码】A                               【文章编号】2095-1752（2014）20-0217-02
         皂苷类成分是参类中的主要活性物质, 具有滋补强壮，增强免疫，抗疲劳的功效[1]，常用的检测方法为紫外分光光度法[2-5]。目前市售含参类的保健食品有片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等，均是以总皂苷含量来评价其产品的质量和功效。其测定方法大多都是按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的方法检测[6]，在实际应用中，主要存在以下问题：1、固定的树脂柱载样量与不确定的样品总皂苷含量之间的矛盾，部分样品存在柱容量超载的情况，测定结果偏差严重。2、部分样品经过大孔树脂柱除杂后，仍存在干扰比色测定的杂质。3、操作步骤欠规范，导致测定结果重现性差。本文针对总皂苷的提取方式、以及测定过程中的参数进行研究，建立了保健食品中人参总皂苷的测定方法。
         1 仪器、材料与试药
        岛津UV2450紫外分光光度计；瑞士梅特勒XS105DU电子天平；上海一恒电热恒温水浴锅；人参皂苷Re(中检所，批号110754-200822，含量88.8%)；儿童装高丽红参液，舒灵胶囊，舒慰快牌胃肠液均购自市场；水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
         2  方法与结果
         2.1供试品溶液的制备
         固体试样：称取1 g样品，置100 mL容量瓶中，加水80 mL，超声提取30 min， 放冷至室温，用水定容至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 mL，进行萃取。
液体试样：吸取试样10 mL至分液漏斗中(含乙醇的保健食品，水浴挥尽乙醇)，加水至约25 mL，进行萃取。
         在已处理好的试样中加入20 mL水饱和正丁醇，振摇萃取3次，取正丁醇层(必要时可离心)，合并提取液，用20 mL氨试液洗涤3次，置蒸发皿中100℃水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，甲醇定容，即得。
         2.2 标准曲线的绘制
         分别精密吸取人参皂苷Re标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL于10 mL具塞比色管中，水浴挥干溶剂，加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，再加入0.8 mL高氯酸，使残渣溶解，于60℃水浴加热10 min，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5 mL，摇匀，于560 nm波长处测定吸光度。取供试品溶液1 mL于10 mL具塞比色管中，自“水浴挥干溶剂”起操作。
         3 方法学考察
         3.1线性关系
         取人参皂苷Re对照品0.01804 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，作为标准溶液，精密量取标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL分别置10 mL比色管中，水浴蒸干，显色，以对照品的质量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：y=4.4807x－0.0886，r=0.9997。结果表明，人参皂苷Re对照品质量在0.0722～0.2165 mg之间与吸光度呈良好的线性关系。
         3.2 萃取次数
         取舒灵胶囊、儿童装高丽红参液，按2.1制备样品水提取液，用水饱和正丁醇分别萃取3、4、5次，结果表明，萃取3次可将人参总皂苷提取完全(表1)。
         表1 萃取次数比较结果


        3.3热稳定性考察
         由于正丁醇沸点较高，为此对人参皂苷的热稳定性进行考察，以便选取合适的水浴温度。取人参皂苷Re标准溶液0.6 mL，分别按60℃、100℃水浴蒸干、100℃水浴蒸干后继续放置30 min处理，测定结果分别为0.663、0.658、0.653，表明人参皂苷的热稳定性良好，因此水浴温度选为100℃。
         3.4显色稳定性
         取人参皂苷Re标准溶液0.3 mL，显色后每隔10 min测定其吸光度，结果表明，显色后的紫红色溶液不稳定，吸光度呈下降趋势，因此显色完成后需在10 min内完成测定。
         3.5重复性试验
         取舒灵胶囊按2.1下方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果表明本方法重复性良好(表2)。
         表2  重复性试验结果


        4 讨论
         本方法通过采用正丁醇溶液萃取，氨试液洗涤除杂的方法富集人参总皂苷，并直接在比色管中显色，减少转移步骤，同时考察了实验过程中的萃取次数、热稳定性、显色稳定性等参数，使得分析过程更标准化，具有除杂效果好、重复性好，操作性强的特点，经过方法学考察，结果均能满足测定需求，因此可作为保健食品中总皂苷含量的测定方法。
         参考文献
         [1]《天然药物化学》肖崇厚 主编，上海科学技术出版社 1987: 298
         [2]刘华刚、肖柳华、陆中海等 含人参皂苷的中药制剂含量测定研究进展[J] 广西中医学院学报 2001,18(1)：106-108
         [3]徐国治、胡国栋、姜平等 五补液中人参皂甙含量测定[J] 甘肃中医学院学报 1994,11(4)：41-42
         [4]黄勇、许倩兮、彭光华 藏药雪灵芝中总皂苷含量的测定[J] 中国药师 2010，13(1)：94-96
         [5]王盛凉、徐宁银 食品中西洋参总皂甙的比色测定法[J] 食品科学 1996,17(5)：46-48
         [6]《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版) 中华人民共和国卫生部 2003：306

毒手药王邓智先

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