EDTA二钠含量测定

紫雨青萍

检测遇到个问题想请教高手们：用紫外分光光度法检测EDTA二钠含量，做线性时，不同浓度吸收度都是两两相同，想不出原因，会是仪器的问题？

世间始终你好

这个问题很关键，而且说明你观察得很细致。你说在用**紫外分光光度法检测EDTA二钠含量**时，做线性发现**不同浓度的吸光度是两两相同**，这在正常情况下显然不合理。

我们可以从以下几个方面排查原因：

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**一、检查实验方案和基本前提**

1. **是否有实际浓度差？**

   * **确认配液正确性**：你的标准溶液是否确实是不同浓度？称量、定容是否准确？有无操作上的“稀释错误”或“共用错瓶”的情况？
   * 有时配出来的多个溶液如果是从同一瓶母液重复稀释，且稀释比例有问题，会导致浓度几乎一致。

2. **EDTA的紫外吸收波长选择对了吗？**

   * EDTA二钠在**紫外区本身无强吸收峰**，一般检测时**是和金属离子形成络合物后再测其络合物的吸光度**（如与Fe³⁺、Cu²⁺、Pb²⁺等）。
   * 如果你直接测EDTA二钠在200\~300 nm的吸收，信号可能很弱或不稳定，造成测量误差较大。

**二、仪器层面问题排查**

1. **光度计是否校准？**

   * 光度计长期使用后光源老化、检测器漂移，会影响吸光度线性响应。

2. **是否使用自动调零（Auto-zero）功能？**

   * 如果不小心把标准样品作为“空白”调零，会导致多个样品显示相同或接近的吸收值。

3. **比色皿是否干净、位置是否一致？**

   * 比色皿污染、水雾、划痕或插入位置不一致，容易造成吸光度误差。
   * 建议用**同一只比色皿反复测定不同浓度样品**，比色皿在每次使用前要清洗干净。

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**三、方法学问题**

1. **是否使用合适显色剂？**

   * 检测EDTA含量时通常不直接测EDTA，而是加入显色剂后间接测量。

     * 比如：FeCl₃ + EDTA → [Fe(EDTA)]³⁻络合物，在530 nm有吸收；
     * 或与Cu²⁺形成蓝色络合物，在730 nm检测。
   * 若你没有加显色剂，吸收度差异极小，仪器无法分辨也会出现“看似一样”的吸光度。

2. **样品浓度是否超出线性范围？**

   * 若浓度太高（吸光度>1.0），或者太低（<0.05），容易出现线性不佳或重复值接近。
   * 建议线性范围选在吸光度0.2–0.8之间最稳。

**建议你重点排查以下几点：**

| 排查项目           | 是否可能造成问题           |
| -------------- | ------------------ |
| 标准溶液是否浓度正确     | 常见错误源，稀释或标记错了    |
| 是否添加显色剂形成可测络合物 |  EDTA二钠本身UV吸收很弱   |
| 紫外检测波长是否正确     |  非特征波长吸收变化不明显     |
| 仪器是否调零错误       | 若用样品调零则样品吸光度都接近零 |
| 比色皿有无污染或位置误差   | 会造成重复误差          |

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如果你方便的话，可以把你用的检测方法简要描述一下，比如：

* 标准溶液浓度范围；
* 是否加显色剂；
* 波长是多少 nm；
* 吸光度读数大概是多少；

我可以进一步帮你分析问题出在哪一环节。

紫雨青萍

世间始终你好 发表于 2025-7-15 11:37
这个问题很关键，而且说明你观察得很细致。你说在用**紫外分光光度法检测EDTA二钠含量**时，做线性发现**不 ...

谢谢分析！试验原理就是依地酸二钠夺取二甲酚橙与铋离子螯合物中的铋离子形成更加稳定的螯合物，使二甲酚橙游离出， 显色应该是二甲酚橙的颜色。
标准曲线做法： 分别精密移取依地酸二钠标准贮备液（0.1mg/ml）0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml至10ml容量瓶中，加混合显色液0.5ml，用pH值为3的HCl-邻苯二甲酸氢钾缓冲液定容至刻度，即得浓度分别为1、2、3、4、5、6μg/ml的标准曲线，同法作空白，在432nm处测定吸光度。
混合显色液是1：1的二甲酚橙容液和硝酸铋溶液。
方法不复杂，可是我们重复过几次试验，线性都会出现类似相同吸收度问题，也没发现操作中有失误。这是第一次测EDTA，我们用的紫外是75-4E，年限有点长。

向前看

432nm条件下按道理不应该出现比色皿不适合？

世间始终你好

紫雨青萍 发表于 2025-7-15 14:34
谢谢分析！试验原理就是依地酸二钠夺取二甲酚橙与铋离子螯合物中的铋离子形成更加稳定的螯合物，使二甲酚 ...

感谢你详细描述方法，问题清晰多了。你用的是**二甲酚橙-铋络合物显色法**测定EDTA，显色物质是**游离的二甲酚橙**，检测波长为**432 nm**，这是一个经典而敏感的方法。

但你多次试验，标准曲线吸光度**两两相同甚至相近**，基本可以断定结果不合理。

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**分析可能问题（按优先级排序）：**

1. **显色反应不充分或反应量远超EDTA量，导致浓度不影响结果**

* **可能原因**：你的显色剂（二甲酚橙 + 铋离子）添加量0.5mL是固定的，而EDTA浓度非常低（1–6 μg/mL），可能远低于显色反应的检测灵敏下限或反应平台期。
* **结果表现**：大量显色剂在，EDTA即使浓度翻倍，释放出来的游离二甲酚橙变化太小，吸光度变化不明显，就表现为“吸光度几乎不变”。

**解决方案：**

* 降低显色剂用量，比如显色剂从0.5 mL调整为0.2 mL，再观察线性；
* 或提高EDTA浓度梯度（如换成5–30 μg/mL）做一版线性，看是否能拉开吸光度；
* **必须验证当前EDTA添加量是否对显色体系构成足够竞争反应**。

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2. **显色反应时间、pH、缓冲体系控制不当**

* 该方法对**pH=3**要求较严格，不在最佳pH下会影响显色平衡；
* 显色是否充分？是否有固定反应时间？反应未完成时检测也会出现线性紊乱。

**建议：**

* 每个样品加入显色剂后**等待5–10 min**再测；
* 加入混合显色剂和缓冲液后要**充分混匀**；
* 若缓冲液配制不准，导致pH偏移，EDTA不能有效夺铋，也可能反应失败。



3. **紫外分光光度计（75-4E）性能问题**

你提到这台仪器“年限较长”，以下是具体可能问题：

| 问题         | 表现              | 是否可能   |
| ---------- | --------------- | ------ |
| 光源老化       | 灵敏度降低，弱吸收无法分辨   | 非常常见 |
| 滤光片老化或位置偏移 | 波长选择误差，导致吸收信号不准 |       |
| 检测器响应迟钝    | 小浓度变化无法识别，数据拉不开 |       |
| 调零/比色皿位置误差 | 空白设定错或每次插入深度不同  |       |

**建议：**

* 用一套标准样重新测一次（如用0.2、0.4、0.6mL），观察能否区分吸光度；
* 或找另一台仪器对比测一组看看；
* 注意空白设定是否确实是**无EDTA的体系**（含显色剂和缓冲液）；

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4. **二甲酚橙或铋离子显色剂失效（储存条件不佳）**

* 二甲酚橙对光、空气、pH不稳定；
* 铋溶液如久置或遇光易降解，形成胶体或沉淀，失去络合能力。

**检查办法：**

* 显色剂重新现配一份；
* 用较大量EDTA（如10 μg/mL）测试是否有明显颜色变化；
* 比较两批显色剂处理结果是否不同。

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综上结论：

> 从你描述的现象“吸光度成对相同”看，更像是**显色反应平台期已达，EDTA太少未能扰动体系**，其次是仪器灵敏度不足或显色剂问题。

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推荐你下一步尝试：

| 操作步骤                | 说明                            |
| ------------------- | ----------------------------- |
| 1. 增加EDTA浓度范围       | 改成5–30 μg/mL 或 10–60 μg/mL 试试 |
| 2. 降低显色剂加入量         | 改为0.2 mL，减少“背景吸收”压力           |
| 3. 加入显色剂后反应10分钟再测   | 保证反应完全                        |
| 4. 显色液现配现用，注意避光储存   | 确保显色能力                        |
| 5. 用另一台仪器（如新UV）对比测定 | 排除老仪器误差                       |

紫雨青萍

世间始终你好 发表于 2025-7-15 17:01
感谢你详细描述方法，问题清晰多了。你用的是**二甲酚橙-铋络合物显色法**测定EDTA，显色物质是**游离的 ...

非常感谢您的专业分析，受教了

世间始终你好

紫雨青萍 发表于 2025-7-16 14:26
非常感谢您的专业分析，受教了

搬运工而已，只希望对你有帮助