现实离15版药典有多远之二：微生物限度篇

豌豆机枪

继续钻研15版药典意见征询稿的微生物限度检查部分，出厂产品们是没一个做微生物限度的，进厂原辅料包
材们打擦边球参照着就行，工艺用水则是最大的原辅料，逃不了改版的命运。
1.营养琼脂（NA）改为胰酪大豆胨琼脂（TSA），玫瑰红钠琼脂改为沙氏葡萄糖琼脂（SDA）
传说TSA比NA灵敏很多，众多一部药典的中药会遭殃，反正殃及不到我们这儿，我可不信水中菌在TSA上会
大大多于NA。再说环境监测平板早已从NA改成了TSA，这会儿抛弃NA，统一管理TSA，便捷了很多。
SDA替代玫瑰红钠琼脂，窃以为玫瑰红钠的“染色”计数虽然便捷，但这染料很伤菌，薄膜上的菌们都奄奄一
息了，对比NA上的菌就活蹦乱跳。
所以换成了SDA，对真菌的供养差不多，点计数难点就难点罢。培养温度小小修改了下，由10版的23-28℃
改为20-25℃。若追求管理细节：玫瑰红钠是红色的，SDA与TSA颜色相近，有混淆的风险。
同理干粉的灵敏度检查都得重做。
TSA：需氧菌总数计数（金黄色葡萄球菌/大肠埃希菌/枯草芽孢杆菌/白色念珠菌/黑曲霉菌）30-35℃
SDA：霉菌和酵母菌总数计数（白色念珠菌/黑曲霉菌）20-25℃
首先小小质疑下，这TSA30-35℃的白念黑曲是不是写错了？能长不？还是说，若是某样品的微生物限度检
查只要求“需氧菌计数”，便可以TSA通吃了？
关于培养基的灵敏度检查细节修改如下：
待测菌液的由10版的“50-100CFU”改为“小于100CFU”，想必是专家们不得不承认一块90mm平皿中黑曲霉菌
的50-100CFU计数实在太难了，于是集体改掉。
计数方式的限制被改没了，10版强制平皿倾注法，现在涂布法也行了，薄膜过滤法不知道行不？呃，我就不
自讨苦吃了，涂布最简单~~
灵敏度合格标准由10版的“不小于对照培养基70%”改为“在对照培养基50-200%的范围内”，切，万一那对照
培养基的营养远差于被检培养基、结果超过200%怎办？比如某个玫瑰假单胞菌在某进口TSA上是某国产
TSA的1000%以上……（众人怒：没见到只需要检 金/大/枯 么？ 它们不挑剔营养！）
2.关于微生物限度计数方法的适用性检查
也就是所谓的方法学验证。这套东西对于出厂产品是必须的，可这儿一个出厂产品的微生物限度检查都没，
最被药典控制的也就是工艺用水的微生物限度检查了，“水”这个东西总不需要做适用性检查的。再接下来就
是A产品正准备报批的新工艺中有个半成品的微生物限度检查，终究也不是成品。再往下看，排上号的当属
制剂用A级原辅料，氯化钠、两个磷酸盐，产品中控性质的A/N缓冲液、E半成品过滤前、Y料液。最后才是
纯进厂检验、纯企业内控的包材微生物限度。
左看右看，也没哪个样品强制适用性检查了。于是排队吧，先搞定无菌检查的那些适用性检查，再折腾你
们。
这儿的细节方面就一条：只要求测试的菌液不大于100CFU。比10版50-100CFU要求低（貌似是沾光了MPN
法的TSB，人家是液体，100CFU以下就行）。10版还有个坑人的规定说“（薄膜过滤法）最后一次的冲洗液
中加入50-100CFU试验菌”，15版的样子是能把菌液直接混样品一起滤，省去冲洗液，多好。
3.计数报告方式
10版：细菌数=NA或玫红平皿中细菌菌落数高的结果，霉菌和酵母菌数=NA或玫红平皿中霉菌和酵母菌菌
落数高的结果
15版：需氧菌总数=TSA的总菌落数（包括真菌菌落数），霉菌和酵母菌总数=SDA的总菌落数（包括细菌
菌落数）
见鬼，似乎是要求翻倍严格了？
如果某样品，所含菌都是些易养的，同时做这四种平皿：
NA：细菌10，霉菌3
玫红：细菌8，霉菌5
TSA：细菌10，霉菌3
SDA：细菌8，霉菌5
按照10版，结果报15CFU；按照15版，结果报26CFU。
当然，15版也说了，你不满意SDA，你就用选择性培养基进行霉菌和酵母菌计数好了，比如那个含氯霉素的
孟加拉红（传说是00版药典的？）也行的嘛！切，才不上当呢，不选用药典推荐的主流培养基，就是自找死
路的说。
好在我们（主要样品）的工艺用水本身菌就不多，原辅料包材的日常水平也远低于内控标准。从严就从严
吧，水处理的压力变大，关我啥事~
什么，还有JG、饮用水的微生物限度检查？那是食品标准看管着的，饮用水用NA，JG用计数琼脂。
4.改版定稿后需做的事情
（1）打探TSA与SDA标准培养基的采购情况。
（2）现在开始如果要买NA或玫瑰红钠培养基，切记不可买多了。
（3）灵敏度检查重做。
（4）找个含菌量较多的样品，比如饮用水（某饮用水偷笑：你以为我真的有菌么？），同步试验新旧四种
平皿计数，看看结果是否真的翻倍了。
（5）进厂产品的微生物限度检查虽然不强制药典，但跟着药典走总没错的，比如参考取样量。
2014.5.16

豌豆机枪

作者本人不愿意露面，原因你们懂的……

yyylggglll

越远越要执行。

幻影

好像发过了。

冰城

对比一定要做的，心里好呆有个底，不过化药问题不大，哭了中药的娃娃们

豌豆机枪

@仲夏秋夜云 这个发过了吗？

开羽

豌豆机枪 发表于 2014-10-13 16:08
@仲夏秋夜云 这个发过了吗？

没发过

静夜思雨

是否大手术了？

mr_tang

有深度，好好读读。

彩虹

按照10版，结果报15CFU；按照15版，结果报26CFU。

15还是13   ？

mr_tang

挺好，每天看点。相当于天天在培训。

龙溪校尉

中药真的有那么难吗

向日葵123

总得培训一下相关知识

1033835919

谢谢楼主，总结的很具体