微生物计数法接种量疑似有问题

红茶.

四部，1105，非无菌产品微生物限度检查：微生物技术法，142页。


144页，一般供试品的检验量为10g或10ml。


一、 在不考虑稀释供试品的情况下，加入不得超过1%，这样加入的菌液体积则最多只能0.1ml，与之前的习惯有不同。既往，我们的习惯量都是1ml，<100cfu/ml。如果这么弄，现在加入的菌量最多不超过10cfu了，有问题。要么就要改变原来的稀释操作方法。
二、 如果是稀释的供试液，那也有问题。先有第“1”句，才跟着出现了“最低稀释级的供试液”这句话，语法上这样有问题。
三、 第“2”句这里也有问题。到底是稀释还是不稀释？不稀释，折算出来的供试液，每ml，最多只能有10cfu左右了。如果是稀释过的供试液，第“1”句总共加了才1%倍体积左右，这里做出来的样品，离100cfu/ml该有多远的距离？

有歧义。。。。。。

我要学习

我理解的1%的问题：传统做法，10g(ml)供试品加入稀释液稀释成100ml供试液，所以供试液是100ml。原来是网平皿中加1ml供试液和1ml菌液做试验组，现在是将菌液加入供试液，使供试液中菌含量<100cfu/ml，所以你100ml的供试液加入≤1ml的菌液。当然，你选择缩小供试液的量，那相应菌液同比缩小就好。反正前提是先将菌液加入供试液，使供试液中菌含量<100cfu/ml，再取1ml含菌液的供试液入平皿

我要学习

我理解的1%的问题：传统做法，10g(ml)供试品加入稀释液稀释成100ml供试液，所以供试液是100ml。原来是网平皿中加1ml供试液和1ml菌液做试验组，现在是将菌液加入供试液，使供试液中菌含量<100cfu/ml，所以你100ml的供试液加入≤1ml的菌液。当然，你选择缩小供试液的量，那相应菌液同比缩小就好。反正前提是先将菌液加入供试液，使供试液中菌含量<100cfu/ml，再取1ml含菌液的供试液入平皿

不拘小杰

没看懂你写的
简单说下自己的理解

以前是菌液是菌液供试液是供试液，在操作上可以达到“单独”在同一个平皿内生长，这样的弊端是可能供试液的抑菌性没得到真正的体现。
修订后的方法是制备一个含菌和供试液的溶液，这样让菌液和供试液充分的接触（可以理解为完全模拟染菌），然后再用“检测”的手段来测试这个供试液。
至于1%是在制备含有供试液和菌液的“试验组”时菌液的体积和供试液的体积的比例要求，避免“过多的”“意外的”稀释了供试液，相当于你在制备供试液时必然要加入多余检验时的液体体积（菌液），那么这个1%就是控制这个体积。
至于每ml多少CFU这个自己想怎么稀释就怎么稀释和本题没有多大关联。

逝水无痕兔兔

9.9ml样品+0.1ml菌液（0.1ml中含菌量为10000cfu）这样讲理解吗？

红茶.

我要学习 发表于 2015-8-24 11:27
我理解的1%的问题：传统做法，10g(ml)供试品加入稀释液稀释成100ml供试液，所以供试液是100ml。原来是网平 ...

照原来的做法，1ml菌液大概是在50-100cfu这个范围内的，现在这样做法，“使供试液中菌含量”，这个浓度基本上在个位数了，这么低的菌量意义大不大？

要么提高菌液原先的浓度，但这样跟现行的要求又不同了，浓度高了，差异好大。

红茶.

逝水无痕兔兔 发表于 2015-8-24 12:57
9.9ml样品+0.1ml菌液（0.1ml中含菌量为10000cfu）这样讲理解吗？

这个浓度太大了吧？

我要学习

红茶. 发表于 2015-8-24 16:20
照原来的做法，1ml菌液大概是在50-100cfu这个范围内的，现在这样做法，“使供试液中菌含量”，这个浓度基 ...

15版药典将菌含量改成<100cfu/ml，而不是原来的50-100CFU，是因为在实际操作中，可能菌含量是40多，其实也是可以的，但是因为之前的要求（50-100）导致不能采用。我实际操作中也遇见过，稀释浓菌悬液时，前一稀释级别菌含量超过了100cfu/ml,后一个又刚低于50cfu/ml，新版药典为了避免这种情况就不再规定那么死。
    最大的变动是，原来的试验组为1ml供试液+1ml含菌量50-100cfu的菌液，就说你在之前要先稀释浓菌悬液培养，找到适合的稀释级别的菌液，再做适用性试验；现在是要先将菌液加入供试液，加入量不能超过1%，但要保证你加入后的供试液中含菌量<100cfu/ml，再用此含菌供试液1ml作为适用性检查的试验组。

逝水无痕兔兔

红茶. 发表于 2015-8-24 16:21
这个浓度太大了吧？

你加进去后菌浓度被稀释了100倍啊

luckylala

这个应该错了吧 我记得应该是不超过10%

pxt33

问题一：微生物现在是按ICH协调案来的，在国外一般都是用商品化的菌株，菌株含量直接是<100cfu/0.1ml，不会自己稀释的。所以以前的加菌浓度到现在就要改变了。体积限定1%是考虑到量大了会有稀释作用。
问题二：不矛盾啊，第一句是菌体积，第二句是菌含量。只是你观念没转变过来。
问题三：稀释还是不稀释？这个需要根据你产品确定，你的加菌量可以随体积的变大而变大啊？只要最终的菌含量<100cfu就行了。要灵活一点。

lyfeiye

你可以用原来所用稀释级的上一稀释级的0.1ml

快乐的鱼7613163

10版的说的比较清晰易懂