qPCR磁珠法提取样本残留DNA，Taqman探针法检测样本残留DNA

hangzhouhdjy

大家好，请教一下：
①用磁珠法提取样本中的DNA时，在DNA的结合、洗涤、洗脱这三个步骤中，将1.5ml离心管放到磁力架上时，发现管内的磁珠聚集程度不是太好。大部分磁珠是聚集成一个圆点出现在管的中间，但有部分磁珠呈拖尾状出现在靠近管底处，在磁力架上转动离心管也不能让拖尾的磁珠来到管子中间，给吸取上清液带来了很大的干扰。这个情况是不是在离心过程中，速度太大时间太长导致？还是与1.5ml离心管有关？
1.5ml离心管的信息是：Axygen的低吸附系列MCT-150-C-L(我能确定不是勿用了Axygen的非低吸附系列MCT-150-C)
试剂盒的信息是：中检院出售的试剂盒
②配制qPCR MIX反应液后，在分装至八连管过程中，多次吸液时发现MIX黏在吸头里情况很常见的且不易排出，还容易在吸头内产生气泡，给吸液的准确性带来了很大的干扰。这个情况是跟吸头有关吗？
吸头的信息是：Mettler Toledo的rainin系列的LTS低吸附20μl的吸头RC-LTS-20μl-L(我能确定不是勿用了rainin系列的LTS非低吸附20μl的吸头RC-LTS-20μl)，配套的是Mettler Toledo的rainin系列的LTS移液器。在配制qPCR MIX反应液时因体积大，而同系列别的大规格的吸头就不太出现黏附的情况。
试剂盒的信息是：中检院出售的试剂盒


各位有什么好的经验可以分享不？感谢

寻尘浅墨

码住，回头来看回答

Margaretd6k

第一个问题，可以先用大枪头吸一次，再用小枪头吸一次。第二个问题，建议用电动排枪，手动排枪的话需要润枪，操作需要技巧，平时要多练习多观察。

范范aru

磁珠聚集问题，可以考虑更换磁力架；mix过于粘稠，使用低吸附枪头用反向移液法移液

美羊羊735693441

换个磁力大点的磁力架，裂解液加多点不知道能不能解决，还有就是孵育温度的问题