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本帖最后由 BLA小助手 于 2022-9-6 11:13 编辑
知识分享 | 如何结合过滤器避免上游支原体污染
作者：乐纯生物（BLA联合发起单位）
引言
近年来，国内生物技术行业发展迅猛，已成为人类健康和制药领域新的风向标，尤其是基于细胞培养和表达的工艺流程，是各种创新治疗产品的关键环节，例如基于CHO细胞体系的抗体或重组蛋白、基于HEK293或昆虫表达体系的病毒载体等。
在细胞培养工艺中，培养基的污染是大家谈论较多的话题。通常情况下，培养基污染可划分为化学污染和生物污染，化学污染包括培养基杂质、内毒素、去垢剂等。生物污染则包含真菌和细菌污染、支原体污染、病毒污染等。
其中，支原体污染是上游科学家最为看重也最为担心的事件。细胞培养过程中支原体的污染可能来源于培养基或添加剂本身、设备和环境、以及操作者等。据文献数据报道，培养基受到单一种群支原体污染的比重约为5-35%，而受到两种或两种以上种群支原体污染的比重则高达7-60%。因此，在细胞培养工艺中，如何有效降低支原体污染的风险，已成为生物工艺中的重要一环。
支原体是一类体积细小（约0.1-0.3μm）、圆形或者丝状的，缺乏肽聚糖类细胞壁的细菌的统称，基于这样的特点，一定数目的支原体可以穿透通常意义上0.2μm的除菌过滤膜，并导致下游料液的污染。因此，在培养基制备的过程中，越来越多的研究员考虑采用0.1μm的过滤膜来降低支原体污染的风险。
与除菌级过滤器类似，部分技术文件提出了过滤器的供应商需对0.1μm除支原体过滤器进行一系列的性能确认（Filter Qualification）的建议，这些确认项目包含但不限于下列内容：
- 与细菌截留实验相关联的完整性测试数据
- 支原体去除研究（支原体截留测试）
- 水流速与压力曲线
- 灭菌稳定性测试
- 生物兼容性测试
- 化学兼容性数据
- 可提取物测试
- USP相关测试
其中，支原体去除研究是评估过滤器降低支原体污染风险的关键性能指标，也是过滤器供应商评估其产品性能的关键要素。完善的支原体截留测试通常包含以下几个重要的考量点：
1） 模式支原体选择和培养制备方式
模式支原体：建议采用Acholeplasma laidlawii (ATCC23206)或等效来源菌种，该模式支原体是常见的培养基污染物，能够穿透0.2μm除菌过滤膜，并且在实验室条件下易于高密度培养，是人体非致病性支原体。通常情况下，建议菌种传代次数不超过15次。
培养基：建议采用MTFB (Mycoplasma Task Force Broth)培养基，配制和灭菌方式参见PDA技术报告。
缓冲液：用于菌体稀释和挑战，建议采用磷酸盐缓冲液 (PB), 配制和灭菌方式参见PDA技术报告。
支原体挑战浓度：建议≥107CFU/cm2。
2） 挑战用过滤器
3） 测试装置
4） 评估标准
0.1μm过滤器的支原体去除性能可以用TR（Titer Reduction）或者LRV（Log Reduction Value）来衡量。
具有优质性能的除支原体过滤器，单位平方厘米（cm2）的有效过滤面积应至少可以截留107CFU模式支原体。
用于阳性对照的0.2μm过滤器，滤过液中应能检测到模式支原体。
测试前后，测试用过滤器和阳性对照过滤器，均通过了完整性测试。
乐纯生物即将推出性能优越的
，其主要特点包括：
双层0.2+0.1μm，具有优秀的支原体截留性能 高度非对称结构聚醚砜（PES）材质过滤器，流速快，载量高 过滤器规格齐全，可提供从180cm2到1.32m2的各种规格囊式过滤器 可耐受高压蒸汽灭菌和辐照灭菌，适于搭配一次性管路套件使用 出厂前100%完整性测试通过 完善的文件体系 本地化生产，供应链稳定
参考资料 1. L. Nikfarjam et. al., Prevention and Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Culture, 2011 2. Z. Soheily et. al., Detection of Mycoplasma Contamination of Cell Culture by A Loop-Mediated Isothermal Amplification Method, 2018 3.BSR/PDA Standard 05-201x, Consensus Method for Rating 0.1 Mycoplasma Reduction Filters, drafted stage, 2020
【关于乐纯生物】 上海乐纯生物技术有限公司，成立于2011年，是先行从事生物制药行业一次性使用耗材及设备研发、生产和销售的高新技术企业。乐纯生物十余年持续赋能生物医药，以技术创新为驱动，提供高品质的生物工艺解决方案，致力于成为全球生物制药企业最信赖的合作伙伴。
乐纯生物深耕生物制药领域，广泛服务于抗体、疫苗、细胞和基因治疗等高科技客户；专注一次性工艺技术产品解决方案，全方位应用在生物工艺中的上游细胞培养、下游纯化以及最终制剂灌装等流程，并伴随生物制药全生命周期，贯穿于研发、中试及商业化生产阶段；引领一次性工艺技术快速本土化的进程，打通了上下游产业链。
乐纯生物拥有多个一次性耗材和设备的生产加工基地，为客户提供高质量的定制化生物工艺解决方案。率先创建了C+A级洁净厂房，一次性生物反应器装配车间，现有万级以上洁净生产车间面积已超5000㎡，一次性生物制药耗材年产能达120万套；一次性工艺智能设备年产能达2500套。
乐纯生物拥有生物医药一次性工艺相关核心专利技术30余项，产品具有安全、可靠、低成本、环保等多重优势，帮助生物技术及制药企业更好地符合新版 GMP、环保和 EHS 等要求。
生物制药国产化推进联合会，英文全称Biopharma Localization Association，缩写BLA。由生物制药研发、生产企业及服务商（含生物制药上下游各细分领域）等共同发起组成，联合会为推动生物制药国产化而生。BLA目标：使BLA成为中国生物制药企业信赖的组织。BLA，for Biopharma，for China.
入会咨询：杨老师，13788930955（微信注明：BLA） | 
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