腺病毒纯化解决方案

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腺病毒（adenovirus, AdV）是一个二十面体的无包膜双链DNA病毒，是一种已经被充分表征和广泛研究的病毒载体。它的直径为70-90 nm，由240个六邻体和12个五邻体组成。五邻体和纤毛的头部顶球结构域可与细胞表面的受体结合，在病毒感染细胞过程中起着非常重要的作用。

图1：腺病毒结构示意图

腺病毒感染的宿主细胞范围非常广，能够感染分化和未分化的细胞（某些抗腺病毒感染的淋巴瘤细胞除外），在最佳感染条件下， 腺病毒感染效率可达100%，且不会整合进宿主基因组，无插入致突变性，适合基因瞬时表达。此外由于感染后通常只会引起轻度的疾病，腺病毒被认为是一种安全的病毒载体，在基因治疗、溶瘤病毒和病载体毒疫苗中得到广泛应用。

腺病毒纯化

腺病毒载体中含有细胞碎片、培养基等杂质，这些杂质如果被注入，会引起宿主的免疫反应，所以在制备腺病毒载体时非常关键的一步就是对其进行纯化。

图2：腺病毒概念模型图

一个完整的腺病毒颗粒，包含2700多种蛋白亚基，分子量达165MDa，分子大小约为0.1um。这些复杂的颗粒很容易产生成千上万种的电荷异构体，给纯化带来巨大的压力。利穗腺病毒纯化解决方案可以帮助客户有效应对挑战，实现大规模腺病毒下游纯化。

图3：腺病毒纯化工艺步骤

01澄清

目的是去除细胞碎片及其他颗粒杂质，得到澄清的病毒液

澄清过滤通常使用微滤级别的滤膜，孔径通常可选0.65um、0.45um、0.2um，根据不同厂家的产品试验选择孔径。

当然除了孔径的选择，澄清微滤在过滤模式上，也有两种模式可选：直滤过滤方式的深层过滤或者切向流方式的中空纤维柱过滤。

选用利穗过滤系统进行澄清过滤，类型灵活、高度定制化的系统可完美贴合工艺需求。

图4：利穗全自动超滤系统

图5：利穗除病毒过滤系统

02浓缩换液

浓缩换液的目的是为后续的层析做准备

浓缩换液最有效的方法是超滤，腺病毒液浓缩换液超滤使用的中空纤维膜柱或膜包的截留分子量通常选择750kD/500kD/300kD。不同厂家的产品试验结果会有所差异。

超滤的过滤方式基本上都是切向流过滤，此时切向流过滤系统的选择，需要考虑到剪切力及浓缩倍数，是否满足需求。

选用利穗超滤系统进行浓缩换液，具有低剪切力、通量最大化、高回收率的效果。

图6：利穗全自动超滤系统

03捕获

腺病毒的层析纯化中，第一步通常使用强阴离子交换的Q填料来对腺病毒进行捕获

此步层析中，可以使用不同的Q填料进行测试，选择捕获效果最好的一款。层析柱也需要选择分流效果好、装柱柱效高的一款，有利于提高层析的收率和纯度。

利穗全自动层析系统采用高精度恒流泵，性能可靠，可长时间不间断运行，全自动软件控制，操作便捷，功能强大。利穗EAC系列层析柱分流板专利设计，保证液流均匀分配，柱效高，收率稳定。

图7：利穗层析工艺解决方案

04精纯

经过捕获之后的腺病毒，还需继续精纯才能达到符合标准要求的纯度

精纯时通常会选用4ff凝胶过滤来进行纯化，将残留的小分子杂质全部去除。当然也可以选用有和4ff填料一样孔径的分子筛功能的复合型填料来精纯（如Core 700)，可以更进一步提高此步的纯化效率。

图8：利穗层析系统及层析柱

05制剂

精纯得到符合纯度要求的腺病毒液后，即可对病毒液进行制剂

一般需要置换溶液、浓缩或稀释调整病毒液浓度。

06除菌过滤

出厂的病毒液剂还需要进行最后一步的除菌过滤

做好无菌环境的控制，使用0.22um的过滤膜直流过滤病毒液。

在漫长的历史长河中，病毒一直扮演破坏者的角色。但是随着病毒学和基因工程学的快速发展，包括腺病毒在内的种类繁多的病毒被越多越来的应用于生物制药领域。勘破病毒的内里乾坤，“驯服”病毒为人类所用，这也是生物制药行业的责任和魅力所在。利穗也将一如既往积极响应客户需求，不断开发和优化下游生产工艺，为客户提供经济、高效的腺病毒纯化工艺解决方案。

关于利穗科技

利穗科技成立于2009年，坐落于苏州工业园区，为国家高新技术企业。目前已建立了产业化制造基地和应用开发技术中心。利穗科技是生物制药分离纯化专业技术和产品提供商，致力于从分离纯化工艺的开发与放大、分离介质的选择与优化、分离纯化设备的定制和分离纯化工程的设计与实施等方面，为客户提供整体解决方案；在过滤分离、层析纯化、在线配液等生物制药工艺上可提供自动化、智能化、个性化的定制方案，我们的产品和服务覆盖药物发现、中试放大和规模生产整个生物制药全过程。目前，利穗在为单克隆抗体、重组蛋白、疫苗和血液制品等生物制药领域的1000多家制药企业和研发机构提供产品和服务。

利穗是生物制药分离纯化专业技术和产品提供商，在工艺开发与放大、介质选择与优化、设备定制和工程设计与实施方面，可提供整体解决方案；在过滤分离、层析纯化、在线配液等工艺上，可提供自动化智能化个性化方案。产品和服务覆盖药物发现、中试和生产全过程。

关于生物制药国产化推进联合会（BLA）

生物制药国产化推进联合会，英文全称Biopharma Localization Association，缩写BLA。由生物制药研发、生产企业及服务商（含生物制药上下游各细分领域）等共同发起组成，联合会为推动生物制药国产化而生。BLA目标：使BLA成为中国生物制药企业信赖的组织。BLA，for Biopharma，for China.
入会咨询：张老师，13062776509（微信注明：BLA）邮箱：blachina@ouryao.com

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学习了，谢谢提供分享。

wancong123

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