特色服务—多糖药物结构确证研究

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特色服务—多糖药物结构确证研究

多糖类药物结构确证是药物研发和质量控制的核心环节，其研究内容涵盖从一级结构到高级构象的全面解析。但因其结构复杂，且多为多组分物质，结构确证难度极大，同时也成为CDE发补的重灾区，发补内容示例如下：

（1）XXX主要成分为XXX，并含有一定量的蛋白质、脂肪、植酸、淀粉等，请采用适宜的方法（如GC-MS）对主要成分XXX的单糖组成及其连接方式进行确证，并采用UV、IR、拉曼光谱、色谱、质谱、电泳、NMR和热分析等适宜的手段对各成分进行结构确证，同时与参比制剂进行对比研究。

（2）请对本品分子量分布进行研究（请提供重均分子量和数均分子量具体检测数据及检测图谱，并计算多分散系数），并与参比制剂进行对比研究。

（3）请对本品聚合度进行研究，并与参比制剂进行对比研究。

（4）请明确本品XXX含量，并与参比制剂进行对比研究。

（5）建议进行结晶度测定，可使用X射线衍射手段。

多糖药物结构确证研究内容

一、一级结构解析1. 单糖组成分析

· 酸水解：三氟乙酸（TFA）或盐酸完全水解多糖为单糖。

· 色谱技术：

o HPLC/GC-MS：定量各单糖种类及摩尔比（甘露醇为内标）。

o 毛细管电泳（CE）：高分辨率分离单糖。

2. 分子量与分布测定

· 凝胶渗透色谱（GPC）：基于分子尺寸排阻原理，需已知分子量标准品校准。

· 多角度激光光散射（MALLS）：绝对分子量测定，无需标准品，可联用GPC。

· 辅助方法：粘度法、动态光散射（DLS）。

3. 糖苷键连接方式与位置

· 甲基化分析：

o 全甲基化后水解，GC-MS分析甲基化单糖，推断连接位点（如Cucanu-Kerek法）。

o 红外光谱验证（3500 cm⁻1无-OH峰表明甲基化完全）。

· 高碘酸氧化与Smith降解：选择性氧化邻二醇键，确定直链/支链结构。

· 核磁共振（NMR）：

o 一维（1H-NMR、13C-NMR）：异头碳信号（δ 90–112 ppm）判断糖残基数及构型（α/β）。

o 二维（HSQC、HMBC）：解析糖苷键连接序列及异头碳构型。

4. 糖环形式与取代基分析

· 红外光谱（IR）：

o 844 cm⁻1（α-构型）、891 cm⁻1（β-构型）。

o 1240 cm⁻1（硫酸基）、1650 cm⁻1（乙酰基）等特征峰。

· 化学修饰分析：如乙酰化、硫酸化位点鉴定。

二、高级结构研究1. 二级结构与分子构象

· 圆二色谱（CD）：检测螺旋结构（如多糖的右手螺旋）。

· 原子力显微镜（AFM）：直接观察分子形态、分支及聚集状态。

· X射线晶体衍射：适用于可结晶多糖的三维结构解析。

2. 序列与拓扑结构

· 酶解/化学降解：将多糖片段化，质谱（MS/MS）或NMR分析小片段序列。

· 质谱技术：

o 串级质谱（MSⁿ）：基于同位素轮廓指纹比对，解析拓扑结构。

o 纳米孔测序与AI辅助：新兴的快速微量分析手段。

常用分析方法对比

分析目标	首选技术	辅助技术
单糖组成	HPLC/GC-MS	CE
糖苷键位置	甲基化分析 + GC-MS	Smith降解
异头碳构型	13C-NMR	IR
分子量分布	GPC-MALLS	粘度法
高级构象	AFM + CD	X射线衍射

山东大学淄博生物医药研究院拥有600M核磁共振波谱仪、高分辨质谱仪、液质联用仪、多角度激光散射仪等多糖结构确证的关键仪器，依托山东大学在糖药物领域强大技术支撑，先后承接肝素、环糊精、纤维素、淀粉类及合成多糖如阿卡波糖、磺达肝癸钠等结构确证研究项目近20个品种，在多糖结构确证领域积累了丰富的经验。

近期，我院针对多磺酸粘多糖成立了专门攻关小组，结合前期项目经验对该项目结构确证进行了重点攻关，目前已突破关键技术，完成了核磁一维谱和二维谱的测试解析、酶解后二糖分析、寡糖分析、磺酸化程度解析、分子量分布研究等内容，具备了为客户提供专业多磺酸粘多糖结构确证技术服务的能力，欢迎垂询！

多糖结构确证经验项目一览表

序号	名称
1	肝素钠
2	依诺肝素钠
3	达肝素钠
4	那屈肝素钙
5	硫酸软骨素
6	透明质酸
7	阿卡波糖
8	羟丙基倍他环糊精
9	磺丁基倍他环糊精
10	羟丙基伽马环糊精
11	甲基倍他环糊精
12	阿尔法环糊精
13	艾考糊精
14	磺达肝癸钠
15	羟乙基淀粉
16	羟丙基淀粉
17	小麦纤维素
18	交联透明质酸