细菌原菌种复溶 接种方法求教

ag231

公司之前一直买的试管菌接种，这次买的是原菌种，请教大神怎么复溶原菌种以及接种？工作用菌种是不是接种之后就可以用，还是传至第三代才能做实验用？谢谢！

yuansoul

@仲夏秋夜云 别人估计会打不了

ag231

yuansoul 发表于 2014-7-22 11:14
@仲夏秋夜云 别人估计会打不了

感谢回答    这个确实需要专业人士解答 我只做过斜面接种   原菌种的据说操作很麻烦
  

歪说歪有李

仔细看热帖，这个问题讨论过。

ag231

vabs 发表于 2014-7-22 15:59
仔细看热帖，这个问题讨论过。

没有查到 还望指点

歪说歪有李

https://www.ouryao.com/thread-219268-1-1.html关于工作菌种可以使用第几代的几个参考资料。
【有奖讨论、投票】工作菌种应该使用哪一代的问题，回帖奖励5金币（50%几率）。https://www.ouryao.com/thread-218528-1-1.html
复壮后是第一代，传代后第二代形态、生化试验鉴定，第二代是营养不良的菌，第二代不用于工作，传到第三代使用（据说这个理论来源于发酵工艺）。

ag231

vabs 发表于 2014-7-22 17:14
https://www.ouryao.com/thread-219268-1-1.html关于工作菌种可以使用第几代的几个参考资料。
【有奖讨论、 ...

非常详细   谢啦  热心人

歪说歪有李

ag231 发表于 2014-7-22 17:37
非常详细   谢啦  热心人

不客气，共同提高

ag231

vabs 发表于 2014-7-22 17:43
不客气，共同提高

还有个问题想请教  一支原菌种是一次就全部复溶呢还是可以挑取部分复溶，其他的再熔封保存？求解

君瀹

ag231 发表于 2014-7-22 17:53
还有个问题想请教  一支原菌种是一次就全部复溶呢还是可以挑取部分复溶，其他的再熔封保存？求解

你的原菌种是冻干状态的吗？

歪说歪有李

ag231 发表于 2014-7-22 17:53
还有个问题想请教  一支原菌种是一次就全部复溶呢还是可以挑取部分复溶，其他的再熔封保存？求解

按说明书操作，应该是一次性。

ag231

君瀹 发表于 2014-7-22 18:05
你的原菌种是冻干状态的吗？

是的   冻干粉

君瀹

ag231 发表于 2014-7-23 08:39
是的   冻干粉

要一次性全部复溶的，使用20%的丙三醇进行复溶后用冻存管冻存，取复溶后的一支接种至相应的生长培养基培养相应的时间观察长势，判断菌种的活力。复壮成功后就可以用冻存管中的菌液往斜面或者平皿上接种工作菌了，此时的菌种是三代菌（默认冻干状态为第一代）

ag231

君瀹 发表于 2014-7-23 09:12
要一次性全部复溶的，使用20%的丙三醇进行复溶后用冻存管冻存，取复溶后的一支接种至相应的生长培养基培养 ...

谢谢  用丙三醇复溶吗  他们有的说用液体培养基复苏后再接种肉汤复壮  我不是很明白  能否留一下你的联系方式  麻烦给详细指教  不胜感激

君瀹

ag231 发表于 2014-7-23 10:33
谢谢  用丙三醇复溶吗  他们有的说用液体培养基复苏后再接种肉汤复壮  我不是很明白  能否留一下你的联系 ...

其实这个是不矛盾的，因为你把冻干状态的菌种要变成液体状态的菌液进行冻存啊，不可能你一支冻干菌种只使用一次啊。然后液体营养肉汤复壮可以的。对的，复壮后再转接斜面或者NA平皿。隔得时间有点久了，记得有点差了。具体的我回去找找相关的资料再详细答复你吧。因为冻干复溶冻存这样的机会比较少，操作也就比较少。
指教不敢当，只能说是探讨探讨吧，我也不算权威，只是接触过一点点而已。希望你能用得上。

ag231

君瀹 发表于 2014-7-23 18:10
其实这个是不矛盾的，因为你把冻干状态的菌种要变成液体状态的菌液进行冻存啊，不可能你一支冻干菌种只使 ...

过来人总是能指到正路上  再三表示感谢  麻烦你继续分享

君瀹

ag231 发表于 2014-7-24 08:31
过来人总是能指到正路上  再三表示感谢  麻烦你继续分享

不用客气，我猜想你大概需要一些控制菌检查的相关东西，我把我手上的一些微生物限度和控制菌的资料分享给你吧，希望你能用得上。

ag231

君瀹 发表于 2014-7-24 12:07
不用客气，我猜想你大概需要一些控制菌检查的相关东西，我把我手上的一些微生物限度和控制菌的资料分享给 ...

现在我的问题是原菌种如何复溶传代到工作用菌种   正在恶补中 非常感谢你的帮助

迷你鼠

冻干粉管的复苏：
1.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，然后将其在酒精火焰上灼烧，用无菌吸管吸取无菌生理盐水或灭菌水滴在灼热的安瓿上，使其遇冷而炸裂；用无菌纱布包裹住裂痕出将安瓿轻轻掰开。
2.在无菌操作条件下转移约1 毫升的营养肉汤培养基或无菌蒸溜水至冻干菌种管中,令冻干粉充分湿润溶解。转移以上菌液至肉汤培养基或固体培养基，在适宜的温度下培养复壮(见附件1)得第一代菌种。
3.将初级菌种接种于相应的培养基上，进行传代培养(见附件1)，得到第二代菌种，次级菌种可用于冷冻保藏和传代使用。
4.菌种特征鉴别：新购的标准菌株需要进行菌种的特征鉴别.

迷你鼠

附件1：菌种复苏传代的培养基及培养基条件
菌种名称        CMCC代码        复苏/传代培养基        培养温度        培养时间
金黄色葡萄球菌        26003        营养肉汤/营养琼脂        30-35℃        18-24小时
大肠埃希菌        44102        营养肉汤/营养琼脂        30-35℃        18-24小时
铜绿假单胞菌        10104        营养肉汤/营养琼脂        30-35℃        18-24小时
枯草芽孢杆菌        63501        营养肉汤/营养琼脂        30-35℃        18-24小时
乙型副伤寒沙门菌        50094        营养肉汤/营养琼脂        30-35℃        18-24小时
生孢梭菌        64941        硫乙醇酸盐流体培养基/营养琼脂        30-35℃        18-24小时
白色念珠菌        98001        改良马丁培养基/改良马丁琼脂培养基        23-28℃        5-7天
黑曲霉菌        98003        改良马丁琼脂培养基        23-28℃        5-7天
备注：菌种的复苏由于迟滞期的延长可能必须延长培养时间直到有生长为止