SDS-PAGE电泳方法学验证

夏菡小屋 · 发表于 2015-12-25 13:09:25

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请教前辈们，关于用SDS-PAGE电泳方法来检测目的蛋白质含量做方法学验证时，需要做哪些项。初学菜鸟，看了一下，是否做准确度、精密度(重复性、中间精密度)、线性、范围、耐用性和专属性就可以了？具体应该怎么操作，有没有参考方案给发一下，或者好的参考资料。谢谢各位了！

fxy0570 · 发表于 2017-7-6 09:28:11

我想问下，楼主解决了吗？我也想做，不知道怎么做，有高手指教吗？

hongwei2000 · 发表于 2015-12-25 14:14:09

这个本身就是定性或限量的方法吧
与TLC类似

夏菡小屋 · 发表于 2015-12-29 12:54:47

hongwei2000 发表于 2015-12-25 14:14
这个本身就是定性或限量的方法吧
与TLC类似

不知道具体应该怎么做，我们计划是用来定量

hongwei2000 · 发表于 2015-12-29 13:07:32

夏菡小屋发表于 2015-12-29 12:54
不知道具体应该怎么做，我们计划是用来定量

你怎么定量
洗下来？
如果定量有毛细管电泳
为什么还要用SGS－PAGE

夏菡小屋 · 发表于 2015-12-31 09:02:07

hongwei2000 发表于 2015-12-29 13:07
你怎么定量
洗下来？
如果定量有毛细管电泳

因为我们蛋白是以包涵体的形式表达出来的，所以。。

.......。。。 · 发表于 2016-3-30 08:48:26

楼主这个问题解决了吗？我也刚接触这方面，也遇到了这类问题啊。

cnosema · 发表于 2016-3-30 11:19:37

hongwei2000 发表于 2015-12-28 23:07
你怎么定量
洗下来？
如果定量有毛细管电泳

定量的话，可以扫描那个染色之后的胶。或者把跑完胶之后转移到膜上，做杂交，杂交之后扫膜（显色反应），或者扫X-片子。

不过用这个做定量，每次都需要跑标准品呀，而且标准品还得有好多个浓度呀

hongwei2000 · 发表于 2016-3-30 11:21:10

cnosema 发表于 2016-3-30 11:19
定量的话，可以扫描那个染色之后的胶。或者把跑完胶之后转移到膜上，做杂交，杂交之后扫膜（显色反应） ...

用这个定量
回收率能保证吗
直接用毛细管SDS电泳就完了呗

cnosema · 发表于 2016-3-30 11:29:06

hongwei2000 发表于 2016-3-29 21:21
用这个定量
回收率能保证吗
直接用毛细管SDS电泳就完了呗

什么回收率呀？

我以为是产品收获/处理之后，取一个小量样品，跑胶，定量，估算出产品里所需产物的具体量，作为最终产品配料的计算基础。

毛细管电泳，不是很了解，需要特殊的电泳设备吧？

cnosema · 发表于 2016-3-30 11:30:24

hongwei2000 发表于 2016-3-29 21:21
用这个定量
回收率能保证吗
直接用毛细管SDS电泳就完了呗

什么回收率呀？

我以为是产品收获/处理之后，取一个小量样品，跑胶，定量，估算出处理之后产品里所需具体产物的含量，作为最终产品配料的计算基础。

毛细管电泳，不是很了解，需要特殊的电泳设备吧？

hongwei2000 · 发表于 2016-3-30 13:04:31

cnosema 发表于 2016-3-30 11:29
什么回收率呀？

我以为是产品收获/处理之后，取一个小量样品，跑胶，定量，估算出产品里所需产物的具 ...

还以为是楼主呢
楼主问的是检验方法
所以有定量一说
定量就要求准确性
回收率就是准确性指标

木木鸡 · 发表于 2016-10-20 13:01:26

方法学验证，这个方法，我没碰到、

づ落葉ぴ無痕 · 发表于 2017-8-1 11:53:55

fxy0570 发表于 2017-7-6 09:28
我想问下，楼主解决了吗？我也想做，不知道怎么做，有高手指教吗？

你解决没？

JOJOFANG1008 · 发表于 2017-11-21 14:30:46

同问，楼主解决了么？

夏菡小屋 · 发表于 2017-12-12 15:56:30

fxy0570 发表于 2017-7-6 09:28
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已跟分析部门讨论制定完方案做完了的

李燕淑 · 发表于 2019-7-12 08:59:34

夏菡小屋发表于 2017-12-12 15:56
已跟分析部门讨论制定完方案做完了的

您好，请问您都做了哪些验证项目？能否交流一下，谢谢

Dylan123456 · 发表于 2020-9-9 17:15:15

交流交流，想学习

少林寺驻泰山办 · 发表于 2021-2-4 10:53:29

夏菡小屋发表于 2017-12-12 15:56
已跟分析部门讨论制定完方案做完了的

能交流一下么？参考一下您怎么做的？

龙氏传奇 · 发表于 2021-10-24 15:15:53

楼主，您好，我最近也要做SDS-PAGE纯度的方法确认，请问您是做了哪些项目，怎么做的，能交流一下吗，谢谢

[方法验证及确认] SDS-PAGE电泳方法学验证