液相方法优化

落落公主ls

有一个产品主峰与紧后峰分离不好，导致积分竖切，杂质结果不合格，我想要两个峰完全分开，来确定真实杂质大小。请各位帮忙看下这个方法可以怎样调整呢？

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飞凌大圣

1、什么产品呀，蛋白类的吗？
2、可以用DAD检测器来看下，每个峰的纯度。
3、可以试着调一下梯度设定，重点关注一下20/25/35的三个时间点。

zysx01234

可以试试将甲醇与乙腈比列改为250:750

乙腈比列高可能出峰会更快，这样就更不容易分离。

zysx01234

还有就是看看主峰前有没有需要关注的峰，如果没有，可以将前20分钟缩短到10分钟或15分钟，然后再梯度慢慢分离。一针走1小时比较费时，系统也比较受室内温度、溶液温度等波动的影响。

落落公主ls

飞凌大圣 发表于 2020-04-05 15:00
1、什么产品呀，蛋白类的吗？
2、可以用DAD检测器来看下，每个峰的纯度。
3、可以试着调一下梯度设定，重点关注一下20/25/35的三个时间点。

请问梯度的调整可以怎样进行呢？我在20分钟这个点降低下有机相的比例，再在后面把比例调整的时间延长至15分钟，这样是不是可以分离效果好点呢？

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落落公主ls

zysx01234 发表于 2020-04-05 18:53
可以试试将甲醇与乙腈比列改为250:750

乙腈比列高可能出峰会更快，这样就更不容易分离。

好的，谢谢，那我先试试

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歪说歪有李

第一：你必须明白你这个这柱子的性能。简单查一下，性能应该不错。建议熟悉或掌握这款柱子的使用指南

Phenomenex 飞诺美 Luna&#174henyl-Hexyl 色谱柱是一款具有良好重现性和稳定性的苯基固定相。大多数苯基固定相使用短丙基（3 碳）链段，这会限制固定相的稳定性。Phenyl-Hexyl 键合相采用含己基（6 碳）链段的苯环，并与 Luna®硅胶表面紧密键合，从而减少键合相水解并提升化学稳定性。结果为：

? 良好重现性与稳定性的苯基固定相

? 苯基固定相和短烷基固定相（C5 或 C8）的双重选择性

? 对芳香族化合物、极性化合物和胺类化合物的出色保留能力

? 推荐用于 US EPA 方法 8330B 进行的爆炸物分析

? 在 1.5-10 的 pH 范围内保持稳定，可以维持 10000 多小时


第二：方法本身因为是梯度洗脱，调整的难度稍微大一些，你的柱子已经是3μm了，应该有不错的性能。
如果你的方法只有当前峰和待分离峰是你的分析峰；那么可以向上述咖所言，降低乙腈的比例，当然这样可能降低主峰的板数。

第三：如有可能调整或增加一个缓升梯度，若你的仪器控制方法可以进行梯度曲线调整，就更好了，梯度曲线改为5→3逐级调整试一下。


第四：当然若你是受控实验室的实验用途，建议同步进行方法学确认，调整的范围严格参考药典通则中的范围限定。