细胞库分枝杆菌检查

小景12

请教下有没有做细胞库的老师可以分享下，进行分枝杆菌检查时，药典要求：“取至少 107 个活细胞用培养上清液制备细胞裂解物，按照无菌检查法（通则1101）进行分枝杆菌检查。”后面又说“取细胞裂解物接种于适宜的固体培养基（如罗氏培养基或 Middlebrook 7H10 培养基），每个培养基接种 1ml 并做 3 个重复，并同时以不高于 100CFU 的草分枝杆菌菌液作为阳性对照。将接种后的培养基置于 37℃ 培养 56 天，阳性对照应有菌生长，接种供试品的培养基未见分枝杆菌生长，则判为合格。”那是要按照1101无菌检查法先用活细胞用培养上清液制备细胞裂解物做真菌细菌检查，再用适宜的固体培养基做分枝杆菌检查吗？ 都需要做方法适用性吗？那用到的检分枝杆菌的适应固体培养基需要适用性检查吗？怎么选择它的试验菌啊？37℃ 培养 56 天，37°有范围没有啊？培养56天用什么耗材器皿或者设备来保证维持培养基不会失水、干裂等情况啊？56天，周期太长，一旦过程中有啥问题，全白费了，而且耽误工作进度，真的太难了，求大神分享。

xbzhang

这个实验用到的分歧杆菌多吗？

王超12345678

罗氏培养基培养到十几天的时候培养基已经干裂，有没有什么好的控制方法，草分枝杆菌阳性菌如何培养建库呢？

耿文皓

王超12345678 发表于 2023-3-31 15:43
罗氏培养基培养到十几天的时候培养基已经干裂，有没有什么好的控制方法，草分枝杆菌阳性菌如何培养建库呢？ ...

实验过用Middle Brook 7H10培养基，保证培养基先用现配的情况下，加上封口膜，再在培养箱中放杯无菌水（随时补充），一般能控制在40天不干裂的。罗氏培养基应该也一样吧

托李斯

耿文皓 发表于 2023-5-12 13:24
实验过用Middle Brook 7H10培养基，保证培养基先用现配的情况下，加上封口膜，再在培养箱中放杯无菌水（ ...

Middlebrook 7H10培养基配制为啥要加甘油呢？

耿文皓

托李斯 发表于 2023-9-8 13:53
Middlebrook 7H10培养基配制为啥要加甘油呢？

甘油一般是作为培养基中的碳源的。