摇瓶工艺—细胞评估

名字不重要

1.1 实验目的和方法
细胞冻存可能对细胞本身造成一定的损伤，因此在细胞冻存后，应当对建立完成的细胞库进行复苏评估，用来确保细胞的活力和功能，这对后续实验研究非常重要。常用方法为取细胞库前中后三支细胞复苏，扩增传代，用于评估冻存整个过程中对细胞本身影响的一同。此外，细胞库长期保存于液氮中，是否对细胞库造成损伤也应该进行评估，根据平台要求，一定时间后也需要进行评估。另外，也有用于优化冻存条件。

1.2 准备工作
参见“摇瓶工艺—细胞复苏”，部门内完成，不需QA环测，但需要数据积累。

1.3 操作流程（常规）：
1.3.1       复苏培养
1.3.2       细胞计数
在生物安全柜内，缓慢摇匀细胞，用无菌移液管无菌取出0.6-1.0 mL细胞悬液，用Vi-cell细胞计数仪进行计数，将摇瓶放回CO2摇床培养箱。满足要求后进行细胞传代准备工作。

1.3.3       细胞传代
培养基预热：按细胞密度计算所需体积的细胞液和培养基（传代后目标密度确定，目标体积为30ml），取所需培养基加入新的摇瓶中，摇瓶编号后，置二氧化碳摇床培养箱中预热不低于30 min。

细胞传代：用无菌移液管将所需细胞液转入预热培养基的新摇瓶中。

细胞计数：缓慢摇匀细胞，用无菌移液管无菌取出0.6-1.0 mL细胞悬液，用Vi cell细胞计数仪进行计数。

将摇瓶放回CO2摇床培养箱进行培养。

如此，以固定的传代后体积和密度进行2-3次传代，用于数据积累，分析细胞生长PDL以及DT，以及活率恢复情况。

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胜利者

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名字不重要

胜利者 发表于 2024-06-24 08:01
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