CE-SDS非还原与SEC-HPLC都是检测蛋白纯度，两个方法有必要都做嘛？有什么区别？

hhhhhho · 发表于 2024-6-28 09:33:56

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求大佬回答

CPu1lajj2u · 发表于 2024-6-28 11:27:43

都需要做的，CE-SDS是分子量低的碎片先出峰，看的是抗体或蛋白的裂解情况；SEC是分子量大的先出峰，看的是抗体的聚集情况，虽然都是评估抗体的纯度，但是关注的点不一样。

张寅 · 发表于 2024-7-2 09:39:52

个人浅见
1.首先作为蛋白纯度的检测，不能只使用一个方法，至少要2个方法，如果IEC和RP都不适合的情况下，也只能用CE-SDS和SEC了
2.虽然CE-SDS和SEC都是以分子量大小为分离依据的，但是区别在于CE-SDS因为加了SDS，所以会将蛋白变性，比如把球形的结构拉成链形的，而SEC更接近于天然的分子结构状态。虽然我还没想出来，变性和不变性，对分子量大小有什么影响。只不过我们自己在做的时候，的确有发生过SDS出来的条带和SEC出来的峰不一致。（请原谅我们没有CE，用的是老的SDS方法，不一定有说服力，只能作为参考）

Htoc8y9jw · 发表于 2024-7-14 17:24:34

张寅发表于 2024-07-02 09:39
个人浅见
1.首先作为蛋白纯度的检测，不能只使用一个方法，至少要2个方法，如果IEC和RP都不适合的情况下，也只能用CE-SDS和SEC了
2.虽然CE-SDS和SEC都是以分子量大小为分离依据的，但是区别在于CE-SDS因为加了SDS，所以会将蛋白变性，比如把球形的结构拉成链形的，而SEC更接近于天然的分子结构状态。虽然我还没想出来，变性和不变性，对分子量大小有什么影响。只不过我们自己在做的时候，的确有发生过SDS出来的条带和SEC出来的峰不一致。（请原谅我们没有CE，用的是老的SDS方法，不一定有说服力，只能作为参考）

CE-SDS也有还原和非还原

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张寅 · 发表于 2024-7-15 09:56:44

Htoc8y9jw 发表于 2024-7-14 17:24
CE-SDS也有还原和非还原

对的，不过楼主问的是CE-SDS非还原的，还原不用说，肯定和SEC有区别的

jordgetl8 · 发表于 2024-7-22 16:30:11

纯度也要多个方法表征，CE-SDS和SDS-PAGE原理差不多，可以二选一；SEC和CE-SDS原理不一样，都可以用。

shark123 · 发表于 2024-9-4 13:41:19

本帖最后由 shark123 于 2024-9-4 13:42 编辑

两个都用作大小异质性分析，总体来说SEC在聚体分析上更客观（CE-SDS中的SDS会破坏非共价形式的聚体，对检测聚体有干扰），CE-SDS在碎片峰分析上更客观（SEC分辨率低且不能有效解离非共价结合的片段）

大神喝水水 · 发表于 2024-9-11 22:01:39

正常做纯度要至少两个方法，这两个一般都要做。SEC关注于聚体，而还原CE SDS更关注于观察轻重链的情况

抱朴y19 · 发表于 2024-10-8 16:33:44

分离原理不一样，表征不同的质量属性。

CE-SDS非还原与SEC-HPLC都是检测蛋白纯度，两个方法有必要都做嘛？有什么区别？

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