TSA培养基如何调PH

偏锋

各位大佬好，我有一个疑问，就是这个培养基配置的实际步骤的问题。
加琼脂、定容、调PH这三步的顺序我吃不准。有大佬帮我解答一下嘛

我之前是一股脑把所有药品称完都加进去，但是调PH的时候担心温度过高损伤电极头，温度低了琼脂会凝固。


还有就是PH和定容，我看网上都是先调PH再定容，但我们这都是先定容再调PH。

鬼使神差

关于培养基配制中加琼脂、定容、调 pH 这三步的顺序，其实不同的方法都有其合理性，具体如下：
先加琼脂再定容最后调 pH
优点：这种顺序可以先将琼脂加入，确保在后续操作中培养基能够凝固，尤其是对于需要制成固体培养基的情况，先加琼脂能避免忘记添加或添加不均匀的问题。然后进行定容可以准确控制培养基的最终体积，保证各成分的浓度准确。最后调 pH 能更精确地根据实际体积和成分来调整酸碱度，因为在定容后溶液的总体积已经确定，此时调节 pH 值更为准确，且能避免因后续定容操作导致 pH 值发生较大变化。
缺点：如果在加琼脂后直接调 pH，可能会因为琼脂的存在影响搅拌的均匀性，导致 pH 值测量和调节不够准确。而且如果温度过高，可能会在调 pH 过程中对电极造成一定损伤；但如果温度过低，琼脂又可能会提前凝固，影响后续操作。
先定容再加琼脂最后调 pH
优点：先定容可以在没有琼脂干扰的情况下，准确地确定溶液的体积和各成分的浓度，操作相对简单直接。之后加入琼脂，由于溶液体积已经确定，能更好地控制琼脂的用量和分布均匀性。最后调 pH 同样可以根据最终的体积和成分进行精确调节，并且避免了在加琼脂前调 pH 可能因后续操作导致体积变化而影响 pH 值的准确性。
缺点：这种顺序可能存在的问题是，如果先定容后放置时间过长才加琼脂，可能会因水分蒸发等原因导致实际体积与定容时有所偏差，进而影响最终培养基的浓度。
先调 pH 再加琼脂最后定容
优点：先调 pH 可以在没有琼脂的情况下，让溶液的酸碱度更容易调节均匀，确保 pH 值的准确性。加入琼脂后，由于此时 pH 值已经初步调整好，后续定容操作对 pH 值的影响相对较小。
缺点：然而，先调 pH 后加琼脂，如果需要加热溶解琼脂，在加热过程中可能会因水分蒸发或其他因素导致溶液体积发生变化，从而使之前调好的 pH 值产生偏差。最后定容时可能需要再次微调 pH 值，增加了操作步骤和复杂性。而且如果先调 pH 后放置时间较长才进行后续操作，也可能会因环境因素等导致 pH 值发生改变。
总之，这三种顺序各有优缺点，在实际操作中可以根据具体情况和个人习惯来选择。同时，无论采用哪种顺序，都需要注意操作的规范性和准确性，以确保配制出的培养基符合实验要求。如果你在操作过程中担心温度对电极的损伤，可以考虑使用耐温性较好的电极，或者在调 pH 时控制好溶液的温度（如在适当的温度范围内进行操作）。另外，对于一些对 pH 值要求特别严格的培养基，可能需要在配制过程中多次测量和调整 pH 值，以保证其准确性。

AaronNie

路过学习        

战战兢兢业业

我们是前面就调好配比，然后定容灭菌，后面再测试pH，用的那种平头的电极

偏锋

战战兢兢业业 发表于 2024-8-27 13:48
我们是前面就调好配比，然后定容灭菌，后面再测试pH，用的那种平头的电极

平头电极是说不怕高温嘛，还是说要放的凉一些再测呀

乱世迷城

你们没用商品化培养基？按说明书配制，测灭菌前和灭菌后的pH就行了

战战兢兢业业

偏锋 发表于 2024-8-27 14:19
平头电极是说不怕高温嘛，还是说要放的凉一些再测呀

放凉了测定，凝固了也没影响

科波拉陈

商业化培养基一般不会出现pH问题。灭菌前后测试误差不超过正负0.2就行

yhgz

路过学习一下

商商

感谢分享学习

机智鼠

您好，关于TSA培养基的配置步骤，一般建议按照以下顺序进行：

1.  加琼脂：将所需的琼脂加入到培养基中，通常按照说明书上的比例进行。

2.  定容：将加入琼脂后的培养基进行定容，使其达到所需的体积。

3.  调PH:在定容后，使用pH计或试纸等工具对培养基的pH值进行调整，使其达到所需的范围(一般为7.2-7.4)。

需要注意的是，在调PH时应避免温度过高或过低，以免对电极头造成损伤或影响琼脂的凝固。同时，也要注意控制搅拌速度和时间，以免过度搅拌导致培养基中的微生物受到损伤。

至于您提到的先定容再调PH的问题，这可能是因为不同的实验室或生产厂家在配置培养基时有不同的习惯和要求。建议您根据自己的实际情况和相关法规或指南进行操作。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

田园小草

不是太懂，明明有TSA干粉可以用，为啥还要有加琼脂这一步骤

平头电极，测的时候，培养基已经凝固，且确保在25℃测，谁在50，60测pH？

另外灭菌前后都需要测试