求助！分光光度计测蛋白浓度法

偏锋 · 发表于 2024-10-30 13:40:11

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公司要求用分光光度计检验新到抗体浓度是否达标。用的如下公式，其中稀释因子为稀释倍数。

但我实际使用抗体进行分光光度检测时，发现好像与这个公式不符，数据如下图。原溶液是15mg/ml，红框标示出来的为按稀释倍数等比换算的，红框右侧为按分光光度及上述公式计算所得。总体出入偏大。

然后我又用BSA（牛血清蛋白）配制成1、2、3、4、5mg/ml的标准溶液，在280nm下建立标准基线。标准曲线建立完后我用BSA溶液又测了一下，标准曲线是准的。
但是我使用上述0.75mg/ml的抗体溶液进行检测时，按标准曲线所得浓度为32mg/ml。

请问各位前辈大佬，我应该是在哪个位置出现离纰漏？或者说我应该如何检测蛋白浓度呢？

偏锋 · 发表于 2024-10-30 13:41:45

如图，这是刚刚没显示出的图

偏锋 · 发表于 2024-10-30 13:42:58

这是我们公司前辈给的公式

ljychg@163.com · 发表于 2024-10-30 13:53:06

蛋白质或多肽的显色反应对人员操作要求比较高，尽量快速准确的操作；
另外供试品溶液的稀释浓度最好在曲线中间点附近，你说的0.75mg/ml，比曲线最低浓度还低，已经不在曲线测定范围内了。
具体情况要具体分析，从你的描述中，暂时只能想到这些。

预感 · 发表于 2024-10-30 16:19:56

我对紫外也不太清楚，过来学习一下

kmyind · 发表于 2024-10-30 17:27:08

有干扰？是不是有带键的保护剂之类的玩意吧

yhgz · 发表于 2024-10-30 21:51:17

多谢分享！

拐角1 · 发表于 2024-10-31 08:42:56

你0.75mg/ml的吸光度值测下来是多少

偏锋 · 发表于 2024-10-31 09:42:23

拐角1 发表于 2024-10-31 08:42
你0.75mg/ml的吸光度值测下来是多少

280nm下是0.968,
260nm下是0.59

落幕灬 · 发表于 2024-10-31 10:48:28

BSA我们以前是用Lowry法测的，挺准的，曲线0.999以上，残差平方和也符合要求；一般有误差就是有干扰物质在或者ph的问题

偏锋 · 发表于 2024-10-31 11:27:01

落幕灬发表于 2024-10-31 10:48
BSA我们以前是用Lowry法测的，挺准的，曲线0.999以上，残差平方和也符合要求；一般有误差就是有干扰物质在 ...

不行啊，我们公司来的抗体一般一次也就1~2ml。抗体测完是需要回收使用的。

[检验及监测] 求助！分光光度计测蛋白浓度法

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