如何除去时有时无的未知杂质

爱死寂寞人1

碰到个棘手问题。一个品种，在1到2分钟时有时会出现一个未知杂质，峰形很好，最大可能有0.1%左右。
样品都是现配的，连续进样样品时该杂峰有越进越大的趋势，但仅在样品中有，中间如插入空白，则空白中无该杂峰。初步调查认为是色谱柱的问题，同样样品换色谱柱后就没有杂峰。而且同一根色谱柱，如有杂峰出现，貌似放置一段时间后，再使用，该杂峰就又没了，然后又是慢慢增大趋势。
现在对色谱柱进行常规的冲洗，或使用异丙醇等进行反冲，杂峰还是消除不掉。想请教下各位大神有什么好的方法去除该杂峰吗？不胜感激！

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以下是一些可能有助于去除该杂峰的方法：

### 一、色谱柱深度清洗
1. **使用更强的清洗溶剂组合**
   - 尝试使用含有二氯甲烷或四氢呋喃的混合溶剂进行清洗。例如，可以将二氯甲烷和甲醇按照一定比例（如1:1）混合后作为清洗溶剂。这些溶剂对许多有机杂质有很好的溶解性，能够深入到色谱柱的固定相内部，溶解并去除可能吸附的杂质。不过，在使用这些强溶剂时，需要注意其对色谱柱的兼容性，先查看色谱柱的说明书，确保不会损坏色谱柱的固定相。
   - 对于反相色谱柱，还可以尝试使用含有缓冲盐的清洗液。如用0.1mol/L的磷酸二氢钾 - 磷酸氢二钾缓冲液（pH 7.0）与乙腈按照一定比例（如70:30）混合，以低速（如0.2 - 0.3 mL/min）冲洗色谱柱。缓冲盐溶液可以帮助去除一些与离子相互作用吸附在色谱柱上的杂质。
2. **长时间浸泡清洗**
   - 将色谱柱两端的接头取下，用上述清洗溶剂浸泡色谱柱。对于一般的分析柱（如250mm×4.6mm），可以浸泡24 - 48小时。浸泡过程中，让溶剂在柱内充分接触固定相，使杂质有足够的时间从固定相表面和内部溶解出来。浸泡后，再用纯甲醇或乙腈以较低的流速（如0.2 mL/min）冲洗色谱柱1 - 2小时，将清洗溶剂冲洗干净。

### 二、色谱柱老化处理
1. **高温老化（适用于部分色谱柱）**
   - 如果是耐高温的色谱柱（如某些气相色谱柱或高温液相色谱柱），可以尝试高温老化的方法。对于液相色谱柱，在不超过其耐受温度上限（如硅胶基质的反相色谱柱，温度一般不超过60℃）的情况下，将色谱柱连接在色谱仪上，用纯甲醇或乙腈作为流动相，以较低的流速（如0.1 - 0.2 mL/min）运行，同时将柱温箱温度升高到接近耐受温度（如50℃），保持12 - 24小时。高温可以加速杂质的解吸和挥发，使杂质从色谱柱中去除。
   - 对于气相色谱柱，老化温度可以根据固定相的类型设定。例如，对于聚硅氧烷固定相的色谱柱，可以在250 - 300℃下老化。老化过程中，以较低的载气流速（如1 - 2 mL/min）运行，持续12 - 24小时，让杂质在高温下分解或挥发掉。
2. **动态老化结合清洗**
   - 在老化过程中，可以结合上述的清洗溶剂冲洗。例如，在液相色谱柱高温老化过程中，每隔一段时间（如4 - 6小时），更换一次清洗溶剂，以增强去除杂质的效果。对于气相色谱柱，可以在老化后，用高纯度的载气（如氢气或氦气）以较大的流速（如10 - 20 mL/min）吹扫色谱柱1 - 2小时，进一步清除残留的杂质。

### 三、检查系统其他部件
1. **进样器和管路清洗**
   - 除了色谱柱，进样器和连接管路也可能是杂质的来源。将进样针用有机溶剂（如甲醇、乙腈）反复清洗，或者更换新的进样针。对于自动进样器，可以使用专门的清洗程序，用较强的清洗溶剂（如含有少量甲酸或三氟乙酸的甲醇溶液）对进样器的样品环、针座等部件进行清洗。
   - 检查连接色谱柱的管路，如有可能，将管路拆下，用清洗溶剂浸泡和冲洗。特别是管路的接头处，容易吸附杂质，要重点清洗。清洗后，重新安装管路，确保连接紧密，无泄漏。
2. **检测器检查和清洗**
   - 如果是紫外 - 可见检测器，检查流通池是否被污染。可以将流通池从检测器上拆下，用纯甲醇或乙腈轻轻冲洗，注意不要损坏流通池的窗口。对于荧光检测器，除了清洗流通池外，还要检查激发光和发射光的光路是否被遮挡或污染。如果是质谱检测器，对离子源进行清洗，按照质谱仪的操作手册，使用适当的清洗溶剂和工具，去除离子源上可能吸附的杂质。

鬼使神差

以下是一些可能有助于去除色谱柱中这种顽固杂峰的方法：

长时间清洗

可以尝试用更强的清洗溶剂对色谱柱进行长时间、低流速的清洗。比如对于反相色谱柱，使用含有少量二氯甲烷（如5% - 10%）的甲醇溶液，以0.2 - 0.3 mL/min的流速冲洗色谱柱8 - 12小时。但要注意这种混合溶剂可能对色谱柱的固定相有一定的损害，需要事先查看色谱柱的说明书确认其兼容性。

高温清洗

若色谱柱允许，升高柱温可以提高清洗效率。例如，有些耐高温的色谱柱可以在40 - 50℃下用合适的清洗溶剂冲洗。不过在升高温度后，要逐渐恢复到室温才能继续正常使用，避免温度骤变对色谱柱造成损伤。

更换密封垫和筛板

有可能是色谱柱两端的密封垫或者筛板吸附了杂质，从而导致出现这种情况。你可以尝试更换新的密封垫和筛板，然后再对色谱柱进行清洗和平衡，看是否能够消除杂峰。

再生处理

根据色谱柱的类型（如C18柱），可以参考相应的再生方法。以硅胶基质的反相色谱柱为例，可先使用甲醇 - 水 - 三氟乙酸（90:10:0.1）的溶液冲洗，然后用甲醇 - 水（50:50）冲洗，最后用纯甲醇冲洗，每个步骤可以用1 - 2倍柱体积的溶液，流速适中。

在进行这些操作之前，最好先和色谱柱的制造商沟通，确保这些处理方法不会对色谱柱造成不可逆的损坏。

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