关于“冻存所用保护剂”

egleeber

请问，菌种、细胞冻存时，如何选择“甘油和二甲基亚砜”

两者有何区别？在选择冻存菌种、细胞时，出于什么考虑来选择？

砍柴樵夫

保护剂目的都是避免因为水分凝结成冰晶而损伤菌种或细胞，
听说：真核细胞冻存常用DMSO，原核细胞就常用甘油。
期待高手详细解答{:soso_e113:}

咕咕

@仲夏秋夜云  

半拉木匠

具体机理不知道  描述一下表征吧
菌种一般都是甘油保存在-20以下的 最终的状态是液体的 所以肯定不会出现冰晶 并且好像还可以提供一些营养（营养这点完全是听说），至于那些保存在液氮中的是什么个情况 我就不知道了。
细胞：含一定量DMSO 的培养液，保存在液氮（-176吧？），最终状态是固体冰疙瘩，冻冰的过程是非常缓慢的梯度降温过程，最主要的伤害是在结冰初期 加入DMSO的作用是尽量少的产生冰晶 也就防止冰洁刺伤细胞了。
也就知道这么多了 希望能帮到你

仲夏秋夜云

首先来搞清楚为什么要加冻存保护剂……
想象一下冻西瓜，西瓜打开，红色的瓤，很多很多小颗粒的泡泡，里面都是水分，一旦冻起来，水分结成冰，刺破了泡泡的膜，也就是细胞膜，再解冻，西瓜就是一滩水，不可能保持原来西瓜的样子，因为细胞膜都破了。
冻存保护剂的作用就是置换出细胞里的多数水分，油份的东西和水分置换置换，冻起来，油状的东西还润泽柔软的，不会形成冰晶，像剑一样刺破细胞膜。冻的时候要缓冻，就是逐步降温，慢慢冻，一般就是置放在异丙醇当中，将异丙醇作为传温媒介，一点点冻，一般四到八个小时之后从室温降到-80℃。而一般用甘油保护的菌体似乎不用梯度降温，一般直接就扔到-20℃了，这个和温差不大、甘油低温保持油状的特性有关。
首先，甘油和DMSO的区别就在于这两者在多低温度下还能保持自己的状态，不变性、不伤害细胞内的细胞脏器。
就好像地板说的，这就是为什么一般甘油用于大肠杆菌等菌体的保存，因为一般保存温度就是-20℃，而DMSO比较稳定，但有明显毒性，好处在于DMSO在液氮气象也就是-176℃中保持润泽，保持细胞休眠状态。
所以保持在超低温下的细胞在37℃下快速溶解之后，需要立刻加入新鲜培养基将冻存液置换出来，养两天再次换培养基，直到所有有毒性的培养基置换出来之后才进入正常培养状态。
总的来说还是因为甘油和DMSO 的本身特性决定的。其实在细胞培养初期，确实有人用甘油做液氮保存的保护剂，但是效果不高，复苏之后，细胞活率低，粘稠状不宜置换等等。加入10%DMSO的培养基配成的冻存液则非常容易用培养基置换。各种因素吧，后来大家习惯超低温保存的，用10%DMSO，复苏之后换培养基。低温保存的细菌类用甘油，复苏之后有的置换，有的直接加培养基培养了……