- 20度低温冻存管保存菌种

524705857

各位大侠，我最近做的菌种甘油管-20度保存，
50%甘油与菌液1:1混合，结果第二天看甘油管有的凝固上，有的还是液体状，求解答。

jkchenly

你抽真空了没有？

524705857

jkchenly 发表于 2015-3-13 10:11
你抽真空了没有？

怎么抽真空啊？我用的是themo的冻存管

524705857

524705857 发表于 2015-3-13 10:23
怎么抽真空啊？我用的是themo的冻存管

这个是应该凝固还是不应该凝固？凝固的冰晶是不是会破坏细胞壁？

524705857

jkchenly 发表于 2015-3-13 10:11
你抽真空了没有？

这个是应该凝固还是不应该凝固？凝固的冰晶是不是会破坏细胞壁？

无为

过第三天再看

圆and缘

零下70摄氏度保存，当然应该结冰。

圆and缘

不用抽真空

524705857

圆and缘 发表于 2015-3-13 11:19
不用抽真空

各位大侠，都怎么保存啊？

524705857

圆and缘 发表于 2015-3-13 11:19
零下70摄氏度保存，当然应该结冰。

我是-20度的

圆and缘

524705857 发表于 2015-3-13 11:40
我是-20度的

-70，规定应该这样的吧，我们药检所买来就是这样的啊，自己转种后也该如此

524705857

圆and缘 发表于 2015-3-13 16:19
-70，规定应该这样的吧，我们药检所买来就是这样的啊，自己转种后也该如此

我们公司没有-70的冰箱，所以-20度。
我今天看22支冻存管还有4支没有冻上。

圆and缘

524705857 发表于 2015-3-16 10:15
我们公司没有-70的冰箱，所以-20度。
我今天看22支冻存管还有4支没有冻上。

那就没用了

524705857

圆and缘 发表于 2015-3-16 12:20
那就没用了

啊？什么意思？

圆and缘

524705857 发表于 2015-3-16 13:37
啊？什么意思？

你的菌复壮后还有活性吗？培养基适用性检查时你这个菌种有用吗？回收率什么的都能达到标准吗？如果不行，就是你的菌种没用了。

524705857

-20度是应该凝固的吧？
菌复壮后有活性，在特定性培养基上菌落形态正确，DNA菌种鉴定结果正确。

524705857

圆and缘 发表于 2015-3-16 13:45
你的菌复壮后还有活性吗？培养基适用性检查时你这个菌种有用吗？回收率什么的都能达到标准吗？如果不行， ...

我现在想知道，为什么这些菌种有的凝固，有的不凝固？
是因为甘油没混匀吗？还是跟冻存管有关系。甘油的最终浓度为25%的。
我13年和14年做的甘油管现在还冻着呢，唯独15年的出现这个问题。
我咨询了下，他们说可能是甘油没混匀，才会出现这种情况，不知道各位大侠是否也遇到了这种现象。

koiop

常用有以下方法：
1 半固体保存法 ：将菌落穿刺接种在半固体中，4度存放，一般可以管3－6月
2 低温冻存法：接种菌落的肉汤加20％灭菌甘油，置－20或－70度，可存放一年以上。
3 真空冻干法：试最理想的保存方法，但需要特殊仪器。
你还可以用磁珠法进行保存，-20度可以保存2年，-70度可以保存3年。。

koiop

用甘油管保存法和冻干粉保存法
基因工程菌：
1：30%的灭菌甘油与培养好的菌悬液按照1：1的比例混合，分装到1.5ML的离心管中，每1ML，存于--20度，但仅保存半年就不太好了，最好保存到——70度的低温冰箱中。
也可用10%的灭菌甘油从斜面上洗下保存。
2：菌悬液中加甘露醇和人血白蛋白