15版药典控制菌检查法大肠埃希菌问题

f59da5f934

本人最近客串微生物方法适用性试验，对微生物这块不太熟，求各路大神解惑！
通则1106控制菌检查法中，大肠埃希菌“供试液制备和增菌培养”提到“取相当于1g或1ml供试品的供试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，.....”，那么问题来了，微生物不熟就是问题多：
1. 我觉得一般要用的培养基，都首先要做培养基适用性检查，那么这里面的[size=14.3999996185303px]胰酪大豆胨液体培养基，在控制菌检查用培养基表格中，又没提到用什么菌种和条件做适用性检查。大肠埃希菌检查用到3个培养基，另外两个是麦康凯琼脂和液体培养基，都有适用性检查菌株。[size=14.3999996185303px]胰酪大豆胨液体培养基用来做大肠埃希菌增菌培养的，总不能以1105通则的计数培养基做适用性检查。
[size=14.3999996185303px]2. “接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）”这个适宜体积应该怎么验证，怎么验证这个范围体积好，其他体积不行。
[size=14.3999996185303px]

[size=14.3999996185303px]求大神路过指点

f59da5f934

第2个问题急需解决，求各位有想法的都说下

永得利

可以取相当于1g供试品的供试液及不大于100cfu试验菌加入到100mlTSB中，在规定的温度及最短的时间下培养，如能检出所加试验菌相应的反应特征，100ml就是适宜的体积。

f59da5f934

永得利 发表于 2015-10-31 09:13
可以取相当于1g供试品的供试液及不大于100cfu试验菌加入到100mlTSB中，在规定的温度及最短的时间下培养，如 ...

以前一般就是加的100ml，但这地方特别指出需要经方法适用性试验确定，所以就有点不解，不知道怎么区分哪个体积更好点，如果没有其他办法，就只能直接在100ml条件下做验证，然后就出结论了。谢谢大神讨论。

逝水无痕兔兔

TSB药典上除了生孢，其他菌都能在里面生长

f59da5f934

逝水无痕兔兔 发表于 2015-10-31 10:40
TSB药典上除了生孢，其他菌都能在里面生长

那样可以不做培养基适用性检查了吗

逝水无痕兔兔

个人觉得 药典上对TSB的适用性检查只在无菌检查里有要求，其他没提到的可以不做

freeer06

体积一般还是和2010版一样100ml，如果样品抑菌性比较强，可以增大体积，所以2015版比较灵活。

lawlypeng

f59da5f934 发表于 2015-10-31 08:30
第2个问题急需解决，求各位有想法的都说下

一般辅料直接加至100mlTSB中即可，验证试验也是能够通过的。向VC原料可能就需要增加体积了（我们目前是调节PH至中性）

lawlypeng

f59da5f934 发表于 2015-10-31 10:45
那样可以不做培养基适用性检查了吗

培养基适用性是每灭菌一次都要做的，你可以看下15版药典微生物有一个指导原则，里边专门有培养基的讲解。

joshua

1、TSB 适用性菌的选择同TSA

2、合适体积培养基和加多少样品有关，之前一般1g样品一般是10ml供试液，而供试品溶液一般不超过加入培养基体积的10%（太稀了没营养），所以一般是100ml； 如果供试品溶液体积是1ml，或膜过滤的，培养基少点也行，验证中阳性能检出即可

joshua

lawlypeng 发表于 2015-10-31 11:25
培养基适用性是每灭菌一次都要做的，你可以看下15版药典微生物有一个指导原则，里边专门有培养基的讲解。 ...

指导原则还是和10版的差不多， 配制方法经过验证，可以一批干粉做一次适用性检查

f59da5f934

freeer06 发表于 2015-10-31 11:10
体积一般还是和2010版一样100ml，如果样品抑菌性比较强，可以增大体积，所以2015版比较灵活。

明白了 估计是考虑抑菌性，做一个100ml过了就可以了

f59da5f934

joshua 发表于 2015-10-31 12:44
1、TSB 适用性菌的选择同TSA

2、合适体积培养基和加多少样品有关，之前一般1g样品一般是10ml供试液，而 ...

做计数法，肯定TSB菌的选择同TSA，但是这边是控制菌检查法中大肠埃希菌检查提到的，也用计数法中菌种合适吗？这不是用来培养大肠埃希菌的么

joshua

f59da5f934 发表于 2015-10-31 13:17
做计数法，肯定TSB菌的选择同TSA，但是这边是控制菌检查法中大肠埃希菌检查提到的，也用计数法中菌种合适 ...

计数里面有其实已经涵盖了 革兰氏阴性杆菌，真不放心就加个 大肠，或者把铜绿变成大肠

f59da5f934

joshua 发表于 2015-10-31 14:08
计数里面有其实已经涵盖了 革兰氏阴性杆菌，真不放心就加个 大肠，或者把铜绿变成大肠

感谢大神提醒，有点明白了，TSB培养基在大肠埃希菌控制菌检查中，用于大肠埃希菌的增菌培养，感觉适用性检查我只要做个大肠埃希菌的促生产能力就可以。

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joshua 发表于 2015-10-31 12:48
指导原则还是和10版的差不多， 配制方法经过验证，可以一批干粉做一次适用性检查

配制方法怎么经过验证呢、有没有什么资料可以分享一下！谢谢

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永得利 发表于 2015-10-31 09:13
可以取相当于1g供试品的供试液及不大于100cfu试验菌加入到100mlTSB中，在规定的温度及最短的时间下培养，如 ...

检出所加试验菌相应的反应特征,是什么特征啊？

一朵玫瑰花

f59da5f934 发表于 2015-10-31 09:18
以前一般就是加的100ml，但这地方特别指出需要经方法适用性试验确定，所以就有点不解，不知道怎么区分哪 ...

有些样品是有抑菌作用的，在100ML中检不出大肠，你就在150～200～300ML中加入大肠，在最少的体积里检出大肠的就是你的样品方法的最适宜体积

小道游游

看完大家的发言，发现我还是知道的太少了。