制药厂，细胞培养室如何杀灭支原体

大河向东流

标题：细胞培养室如何快速杀灭支原体，保证无菌操作    

关键词：细胞株支原体污染；如何快速杀灭支原体病菌；杀灭细胞培养室支原体细胞

细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明，95％以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.laidlawii），为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。

各国细胞库支原体污染的统计表，如下：

        

国家

         

受支原体污染（%）

         

报告年度

     
      

USA－FDA

      

15

      

1993（past 30 years）

   
     

USA－ATCC

      

15-20

      

1992

   
     

Japan－（IFO，RIKEN，JCR

      

80~30~22   

      

1981 1987-1993 1998

   
     

Germany－DSM

      

36

      

1990-1994

   
     

Argentina

      

65

      

1987

   
     

Israel

      

32

      

1986-1993

   
     

China

      

95

      

1990

   

造成支原体高污染率的原因为：
1、支原体size 0.1~0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）
2、支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化
3、过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式
4、细胞流通间缺乏品管，造成实验室间的相互污染
5、研究或操作人员忽略污染问题

而支原体污染了来源：
1、已受污染的细胞
2、操作人员的疏失
3、已受污染的培养基、血清
4、操作环境不良、实验器具不洁等

支原体的污染是目前细胞实验室比较普遍存在的问题，用药物来杀灭支原体虽是一种重要措施，毕竟是一种补救方法，而且清除后，支原体仍可重新污染细胞。

因此，重要的还在于预防，如何有效杀灭实验室空间支原体病菌，保持细胞培养间洁净和严格无菌操作才是重中之重！

近期与很多行业专家交流，并翻阅了不少资料，得知进口过氧化氢干雾灭菌系统已经被很多药企，实验室使用，遂再次与各位交流下下该灭菌方案的实用性，已经使用过该设备的认识探讨下。经查该设备的具体灭菌原理如下：

欧菲姆干雾灭菌系统

【作用原理】 通过向需要灭菌的区域扩散干雾来完成喷雾过程，当液滴的平均直径小于10微米时，喷出雾可以称之为“干”的，小的液滴会从墙面上弹开并且不会破裂使表面潮湿，而所有的条件的建立都是为了满足杀孢子剂以气化的形式有效的移动到指定的区域，这种形式的特性决定了它们可以移动到平时难以到达的区域。
干雾有如下特性：
1、 干雾不凝洁，不会产生大的液滴掉落表面。
2、 干雾不附着，不会吸附在墙面使表面潮湿。
3、 干雾悬浮在空中不会沉降并进行无规则运动，能扩散到各个区域。 诺福杀孢子剂和欧菲姆干雾设备的出现，让众多制药企业找到了最佳灭菌方式。诺福杀孢子基于过氧化氢和银离子，是全球最高效的杀孢子剂，可以在3-5分钟内对黑色芽孢杆菌的杀灭率达到6-8个log。配合全球最佳干雾设备：欧菲姆干雾机。
该方案具备如下特点：
l 可以对黑色枯草芽孢杆菌达到6-8log杀灭率，同时可以杀灭200多种有害微生物，包括霉菌，艰难梭菌，超级细菌等 l 只需要2-3个小时即可完成整个杀菌流程，极大的节约了企业的生产时间
l 完全无毒，员工使用友好，极低的腐蚀性，无残留，欧盟进口，安全认证
l 验证资料充分，有验证资料模板，可以迅速帮助企业完成验证报告的撰写
l 符合新版GMP要求，符合药典要求，众多国内制药企业成功案例
l 成本是气态过氧化氢的20-30分之一，目前性价比最高的灭菌方法 该方案应用简单，在满足A/B 区灭菌要求的同时，也可以进行C/D区的消毒。