细胞培养-成团成片统计交流

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20250515
三伏培养痛点共同验证
虽然高手一般会避开三伏天细胞培养（容易污染），新应用自动化培养基础储备需要面对更多痛点难点，我们与用户就三伏天容易污染做以下解决问题尝试合作。
三伏天黑点去除验证，大院所五家以上（验证概率说明效果，最少三家实验室），才可发免费试用，单用户不发，统计痛点，成因，解决思路共享，自动化技术储备目的。
注：试用前没问题描述，所用试剂耗材厂家货号，问题描述，预期解决结果成度。
种子库备份方案，对接正规库来源细胞，进口试剂耗材。方法共享。
如能顺利救助，可做以下推荐，后面国内建系，救助，自动化培养技术储备等很多实验都会用到。
简易单克隆方法推广用途，细胞老化组单克隆筛选更新种子库，备份种子库，种子库更新，污染后单克隆后小体量细胞去污染方便，快捷，节省试剂，救助技术备份。自动化培养冗余技术储备，冗余方案备份。
冻存复苏活率种子库应用备份推广，传统DMSO方法推广，各类团聚因素影响，及参考备份方案。

适用痛点问题验证
类器官，耐药株，维持培养，超量维持培养目的，小体量预实验验证痛点问题关键点有说服力。无血清含血清替换。
注：
类器官：无血清方案的，建议含血清小体量验证按上述，简单说明问题，如能培养顺利，考虑因子耗尽，PH变化，污染等情况排除。
耐药株：受损后细胞最容易出现黑点问题，救助恢复培养体系建议平时小问题时验证并评价各体系区别，救助是恢复，这个关键。不只是简单生长，足量营养保证。也不能只是简单理解成增殖快单方面，还要做完整冻存复苏验证，才能说明试剂体系平稳验证并长期验证跟踪数据。

验证目的：种子库试剂与技术储备，成本虽高，但用量不大，国产体系备份早做设计备份，延申应用，建系、耐药株建立、真核蛋白质晶体囊括痛点细节验证。积累技术储备。

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细工多细胞共培养通用培养基应用参考                                                                                               
神经干细胞        通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、人LIF、Noggin、bFGF、EGF                                                                                       
皮质神经元        通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、Noggin、bFGF、EGF                                                                                       
多巴胺能神经元        通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、人LIF、SHH、FGF8、BDNF、GDNF、TGFβ3、cAMP                                                                                       
运动神经元        通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、全反式视黄酸（ATRA）、SHH、BDNF、CNTF、GDNF                                                                                       
星形细胞        通用培养基、谷氨酰胺、非必需氨基酸、青霉素-链霉素、FBS、bFGF、CNTF、BMP4、激活素A、Heregulin 1β、IGF-1                                                                                       
少突（神经）胶质细胞        通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、SB431542、CHIR99021、化合物E、人LIF、全反式视黄酸（ATRA）、SHH、SAG、PDGF、IGF-I、NT3、胰岛素、T3、cAMP                                                                                       
心肌细胞        通用培养基、B27、rH-白蛋白、L-抗坏血酸2-磷酸、乳酸、CHIR99021、Wnt-C59                                                                                       
骨骼肌        通用培养基、FBS、谷氨酰胺、青霉素-链霉素、非必需氨基酸、2-巯基乙醇、油酸、亚油酸、硫酸铁、葡萄糖酸铁钠、马血清、Y-27632、bFGF                                                                                       
血管内皮/平滑肌        通用培养基、谷氨酰胺、Neurobasal培养基、N2、B27、CHIR99021、BIO、Y-27632、BMP4、VEGF、Forskolin、PDGF-BB、激活素A、肝素                                                                                       
肝细胞        RPMI 1640、B27、激活素A、BMP4、bFGF、HGF、Oncostatin M                                                                                       
胰岛 β 细胞        通用培养基、IMDM、牛血清白蛋白、N2、B27、ITS、BMP4、激活素A、FGF7、Noggin、bFGF、EGF、烟酰胺、Exendin-4、全反式视黄酸（ATRA）                                                                                       
肺        通用培养基、谷氨酰胺、B27、N2、抗坏血酸、硫代甘油、胎牛血清、青霉素-链霉素、Y-27632、Dorsomorphin、SB431542、IWP2、CHIR99021、BMP4、bFGF、激活素A、FGF-10、FGF7、EGF、全反式视黄酸（ATRA）                                                                                       
jurkat,HL-60,THP-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6        通用培养基、胎牛血清、国内细胞库来源                                                                                       
HUVEC        通用培养基、胎牛血清、国内细胞库来源                                                                                       
成纤维细胞 3T3        通用培养基、胎牛血清、国内细胞库来源                                                                                       
难养细胞系类，乳，肝，免疫，胰岛胰腺，生殖类，腺-神经共存类，神经类，正常细胞系，缺氧-维持-驯化-分化培养等特殊需求通用国产体系备份方案               
两种以上共培养细工通用培养基应用参考
注：类器官应用，含血清方案，先二维，足量细胞后在用成球配套球培养方法，培养中痛点先行预实验验证。       
1：牛血清用量5-15%根据因子配套使用量加减，       
2：织离体处理步骤繁琐的（化学成分影响）可考虑我司推荐无外力（化学力，机械力）影响直接剪碎后培养，生长顺利后，在用简易单克隆出目的细胞，建系前几代培养会顺利很多。需要详细potocol来信告知。       
3：黑点，生长慢组建议用备份组，也建议遇到同类问题先行验证生长顺利可行性，慢病毒建系我司提供高质量预实验方案（十倍百倍滴度可行性验证可以预实验为主）       
4：存复苏：推荐传统DMSO+40-90%胎牛组，程序降温优化（理论每分钟降0.4-0.6）原代与免疫细胞验证预实验先行。       
5：经类，腺类，上皮类包含多种特点并存的，根据生长特点具体问题具体分析，例如：免疫类细胞系分化后继续共培养，细胞状态要求极高（不只是当前两三天培养）我们目的是超长时间共培养，含血清方案优势会非常明显（预实验能说明），通过培养种问题解决预验证极为重要，修复部分需要试剂高质量，技术特点熟悉，问题充分理解，并解决问题。       
6：可建系目的首选用户，合作方式灵活，我司提供案例细胞293，问题验证的标明，配套试剂组合免费试用，院校组最少三家实验室共同申请免费试用，各类难养系需国内正规库来源，问题详细描述，需要救助理想状态。