初始污染菌最后样品的琼脂覆盖问题

K2d81fae8

最后用1毫升的移液枪取1毫升，放入培养皿，然后倒入琼脂培养基，逆时针晃动几次，就可以了，然后房子实验桌上 等 TSA 和 SDA冷却凝固，TSA培养皿正方培养，SDA倒放培养，TSA3天 SDA5天

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   初始污染菌检验规程
1. 目的 
检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。 
2. 适用范围 
适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。 
3.职责 
由质检部负责执行实施。
4.技术要求
产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g
5.引用标准
GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准
中华人民共和国药典（2015版）
GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物学试验方法
6.试剂和培养基
6.1洗脱液 0.9%Nacl  
称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。
6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基
取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为7.3±0.2，
灭菌分装。
6.3玫瑰红钠琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基31.5 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为6.0±0.2，
灭菌分装。
7.仪器设备
锥形瓶  量筒 高压灭菌锅 试管 灭菌培养皿 灭菌刻度吸管 超净工作台  酒精灯 恒温培养箱 洗耳球
8.操作方法
8.1样品处理
    8.1.1无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。 
8.1.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。
  8.2接种
8.2.1需厌氧菌
取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
8.2.1霉菌
取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
  8.3培养
    需厌氧培养基置于37℃培养3d  ，霉菌培养置于28℃培养5d
9.观察计数
达到培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，记录每个平皿菌落数
10.结果计算与报告
   10.1公式
           污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重
   10.2菌落计数基本规则 
选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。  菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。 
       如果样品菌落总数超过标准的规定，则按10N逐批稀释 
   10.3填写试验记录，报告结果

斯帝罗兰深

K2d81fae8 发表于 2019-10-25 09:49
初始污染菌检验规程
1. 目的 
检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。&nbsp ...

初始污染菌有一个校正因子的概念（或者说是回收率的概念，两个概念是互为倒数的）。我们现在只要把校正因子算出来，那后面再做初始污染菌的时候就可以只洗脱样品一次就可以了（在得出校正因子这个实验中，样品需洗脱4次，最后把样品琼脂覆盖，来得出样品的“菌落总数”，后计算出校正因子）。
看到你的实验方案中，只洗脱一次，这个是不能保证你可以把样品上“所有”的菌都洗下来的（或者你们做过验证），这样不能称之为污染菌总数吧？
然后你们选用的玫瑰红钠琼脂培养基不知道是参照你引用的哪个标准？
以上个人理解，如有不对，望指正。

斯帝罗兰深

K2d81fae8 发表于 2019-10-25 09:48
最后用1毫升的移液枪取1毫升，放入培养皿，然后倒入琼脂培养基，逆时针晃动几次，就可以了，然后房子实验 ...

正放培养？我们都是倒放的，不知道你是参考哪里？

宛在水中央

初始污染菌检验参考GB/T 19973 来做的。关于琼脂覆盖，如果样品很大或者不规则无法覆盖可以用再次洗脱代替，也可以用接触碟试试（适用于比较规则的样品）。检验液一般都是平均分的，最后菌落总数要乘以2。目前国内的用TSA和SDA 两种培养基的。国外的有要求测试厌氧菌的，需要再增加一个培养基。。

斯帝罗兰深

宛在水中央 发表于 2019-10-28 17:21
初始污染菌检验参考GB/T 19973 来做的。关于琼脂覆盖，如果样品很大或者不规则无法覆盖可以用再次洗脱代替 ...

假设样品可以琼脂覆盖不知道你是怎么分在两个培养基里的呢？

宛在水中央

斯帝罗兰深 发表于 2019-10-30 09:05
假设样品可以琼脂覆盖不知道你是怎么分在两个培养基里的呢？

做洗脱验证的时候只用一种TSA培养基。

斯帝罗兰深

宛在水中央 发表于 2019-10-30 09:34
做洗脱验证的时候只用一种TSA培养基。

额，难道方案验证和之后的实验不应该保持一致的么，培养基也属于需要验证的一环吧？

逝去的年华

斯帝罗兰深 发表于 2019-8-6 13:54
额，最后的琼脂浇注，是为了统计微生物的总数，因为在浇注前，会将样品进行4次洗脱，怕洗脱不下来，所以 ...

GB/T19973.1中，移至培养皿这一步是怎么做的啊，用的哪种方法，是薄膜过滤法还是平板倾注或者其他，我们是敷料类的产品，薄膜过滤效果最好，但纤维会阻塞滤器，但感觉平板倾注误差太大了

逝去的年华

斯帝罗兰深 发表于 2019-9-19 09:06
有纸塑袋，有吸塑盒，包装有拿拭子擦拭，也有拿生理盐水直接冲洗，但以个人理解最后的琼脂覆盖应该是样品 ...

但你擦拭后是把棉拭子放洗脱液里了啊，做修正系数的时候是做的有棉拭子的洗脱液，不是包装啊

斯帝罗兰深

逝去的年华 发表于 2020-3-15 16:27
GB/T19973.1中，移至培养皿这一步是怎么做的啊，用的哪种方法，是薄膜过滤法还是平板倾注或者其他，我们 ...

19973.1中的，你的有纤维可以参考

斯帝罗兰深

逝去的年华 发表于 2020-3-15 16:33
但你擦拭后是把棉拭子放洗脱液里了啊，做修正系数的时候是做的有棉拭子的洗脱液，不是包装啊

棉拭子不就是一个介质把菌弄下来么？这菌是包装袋上的啊

逝去的年华

斯帝罗兰深 发表于 2020-3-16 09:19
棉拭子不就是一个介质把菌弄下来么？这菌是包装袋上的啊

楼主，可以加个qq,讨论下么2761644221

逝去的年华

斯帝罗兰深 发表于 2020-3-16 09:12
19973.1中的，你的有纤维可以参考

我看到这一条了，但是在平板倾注这一项下提到了，不适用于低浓度的悬液，还有此处的过滤/平板接种的意思是过滤，平板接种任选一种的意思吧

zhangside001

yuansoul 发表于 2019-8-6 14:16
我真没看懂他说的。

如果是 限度数量检视，薄膜过滤后 贴片培养。

GB 15979-2020标准出来了吗