DNA质粒纯化控制内毒素和宿主蛋白残留

疏大平 · 发表于 2022-1-17 12:06:06

您需要登录才可以下载或查看，没有帐号？立即注册

x

各位药界大神：大家在质粒精纯过程中使用哪种填料可以去除内毒素和宿主蛋白残留？

月辉 · 发表于 2022-1-17 13:32:34

阴离子，Q层析填料

唐e3phf8pp · 发表于 2022-1-17 16:32:51

质粒纯化不都是用经典3步法吗？纯化的第三步就是去内毒和残留蛋白，之前推荐用Source 30Q，现在有推荐用Capto Q ImpRes。

ponsor · 发表于 2022-1-17 16:37:09

当溶液pH＞2时，内毒素带有负电荷。因此内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。柱上的内毒素可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。

疏大平 · 发表于 2022-1-19 14:10:53

唐e3phf8pp 发表于 2022-1-17 16:32
质粒纯化不都是用经典3步法吗？纯化的第三步就是去内毒和残留蛋白，之前推荐用Source 30Q，现在有推荐用Cap ...

没采用经典三步法

疏大平 · 发表于 2022-1-19 14:11:33

ponsor 发表于 2022-1-17 16:37
当溶液pH＞2时，内毒素带有负电荷。因此内毒素与阴离子交换介质Q或DEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。柱 ...

1M盐能不能洗脱下来？

唐e3phf8pp · 发表于 2022-1-19 15:58:15

疏大平发表于 2022-1-19 14:11
1M盐能不能洗脱下来？

内毒素本来就是带负电荷，电荷结合能力更强，通常只有在柱再生的时候才能清除，采用1-2M NaCl或1 M NaOH CIP去除；或者通过疏水层析去除，内毒素在高盐下会直接流穿。

小金库 · 发表于 2022-7-23 20:48:38

非常感谢分享

17802590269 · 发表于 2022-8-1 14:47:00

用BLA整体住，阴离子层析

meng.yu · 发表于 2023-9-20 09:48:03

IE X