微生物方法学验证

jerrynica

样品为非水溶性物质，絮状混悬液，抑金葡，用薄膜过滤法也不行，现将供试液1：100稀释，但回收率43%还是达不到，怎么办？供试液还可以再扩大稀释倍数吗？标准得《200CFU/g，还是培养基稀释法？

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mxl965

加中和剂去除抑菌性

JarvanWL

标准是≤200cfu/g，稀释到1:100都做不出来，再稀释不太适合。
按你的描述，样品抑菌效力一般，可能是薄膜过滤有残留，建议用吐温80或者药典上其他中和剂配制缓冲液，增加过滤效果和中和作用。
摸方法就做金葡回收率，吐温80比例建议多做几个梯度（0.5%、1%、3%、5%），正式验证时做全菌种，加一组中和剂对照组。

jerrynica

JarvanWL 发表于 2022-09-13 10:02
标准是≤200cfu/g，稀释到1:100都做不出来，再稀释不太适合。
按你的描述，样品抑菌效力一般，可能是薄膜过滤有残留，建议用吐温80或者药典上其他中和剂配制缓冲液，增加过滤效果和中和作用。
摸方法就做金葡回收率，吐温80比例建议多做几个梯度（0.5%、1%、3%、5%），正式验证时做全菌种，加一组中和剂对照组。

吐温80本来就加的，中和剂对照组也做，那么吐温80加的量，也会影响样品回收率吗？他不是分散剂吗？

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13736596469

jerrynica 发表于 2022-9-13 10:53
吐温80本来就加的，中和剂对照组也做，那么吐温80加的量，也会影响样品回收率吗？他不是分散剂吗？

任何加入到供试液中的成分，量多了对菌的生长都会有影响， 只是有些配比药典已经证明其无毒性，比如0.1%吐温80的蛋白胨缓冲液。

JarvanWL

jerrynica 发表于 2022-9-13 10:53
吐温80本来就加的，中和剂对照组也做，那么吐温80加的量，也会影响样品回收率吗？他不是分散剂吗？

肯定影响的，1%以上其实效果都差不多。如果你本身已经加了1%以上的吐温，那就没必要再试了，可以试试先过滤样品再加菌。

Rainror

任何加入到供试液中的成分，量多了对菌的生长都会有影响， 只是有些配比药典已经证明其无毒性，比如0.1%吐温80的蛋白胨缓冲液。

郭昌炉

楼主我想请教下，你这个样品是絮状混悬液，你怎么检大肠埃希菌，如果取1g的量应该会有部分供试品残留在滤膜上导致Tsb培养基直接变浑浊吧，怎么观察呢

jerrynica

郭昌炉 发表于 2022-09-18 12:32
楼主我想请教下，你这个样品是絮状混悬液，你怎么检大肠埃希菌，如果取1g的量应该会有部分供试品残留在滤膜上导致Tsb培养基直接变浑浊吧，怎么观察呢

它絮状混悬液，时间长会沉淀下来，在瓶底，也可以观察

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西瓜双

目前也在做一个微溶于水的原料药，也是金葡抑菌性较强，前辈们建议换低吸附性膜，同事注意加菌顺序，供参考，共勉吧