同一个检测序列，刚开始分离度3.2；序列运行结束1.4，会是什么原因

蜡笔12

1、分析方法时长70min，梯度（中间位置有机相浓度最高67%，开始、结束都是10%）；
2、分别比较第1针、第36针、第70针色谱图压力；开始、结束压力均为190bar左右；中间位置压力分别为：132bar、123bar、120bar。
求解：造成分离度显著降低的主要原因是什么？

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原因很多，比如柱效过程，多次梯度柱效下降。柱压升高你可以去看看和调查。组分的稳定性是否产生变化，液相设备状态（比例控制部分，如比例阀。各品牌名称不同）是否良好？流动相（尤其是盐类与有机项）例如磷酸盐和乙腈的问题就十分复杂，盐类是否在运行过程中会有析出和不稳定因素影响。这些都需要去一一去调查。个人见解，仅供参考。如有不当之处还望包涵和赐教。

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色谱柱的影响可能是最主要的，其他都是间接影响色谱柱。最终导致柱效下降。

七-月

1、一开始检验的时候是否还没平衡好？？平衡好请忽略。
2、什么色谱柱？流动相是否会对柱效有影响？色谱柱能否耐受这些盐和有机相的变化，详看说明书或问供应商。
3、和第二点一样，色谱柱是否能在这种条件下连续使用很长时间？是否连续使用较长时间需要进行清洗或活化，如离子柱，糖柱？如是，就需要进行规定。
4、色谱柱质量问题，那就更换更贵的色谱柱。
5、流动相连续使用多久？是否有了成分变化？挥发？沉淀？分层？
6、仪器长时间使用后，比例阀，在线混合可能会有偏差，也可能造成影响。