微生物方法适应性

九九emj

微生物分析方法薄膜过滤法在抽滤时供试液会将滤膜堵上，导致稀释液无法进行抽滤。想请教各位大佬有没有解决方法，还望告知！

余默

加大稀释倍数

九九emj

余默 发表于 2023-2-9 16:09
加大稀释倍数

样品标准为200cfu/g 已经做到1:100了 不好在加大了

门门

那就别用薄膜过滤法了。
改为平皿法。
如果抑菌性不好消除，那就供试品稀释，接种也分到几个皿里（扩大培养基体积），中和剂和灭活剂 加油试！
自己做不好 就花钱找第三方做。最好是找省级药检所，这样做出来的成果 ，没有GMP文学家们找茬！

九九emj

门门 发表于 2023-2-9 16:37
那就别用薄膜过滤法了。
改为平皿法。
如果抑菌性不好消除，那就供试品稀释，接种也分到几个皿里（扩大培 ...

您的意思是平皿法2组共10个皿，每皿加0.2ml的菌吗？ 计数结果怎么算？

门门

九九emj 发表于 2023-2-9 17:48
您的意思是平皿法2组共10个皿，每皿加0.2ml的菌吗？ 计数结果怎么算？

对！平皿法通常是2个皿取平均嘛。你这个例子就是，5个加一起代表  一个皿，另5个加一起代表第二皿， 两个取平均。（其实就是10个数加一起除以2）。
当然，不一定是5个，也可以是2个，10个，看什么时候方法适用性试验 回收率能符合0.5~2就行了。
0.2ml不需要多么精确，只要5个总共1ml 即可，做的时候就是直接取1ml，然后慢慢往下放即可。。

九九emj

门门 发表于 2023-2-9 18:21
对！平皿法通常是2个皿取平均嘛。你这个例子就是，5个加一起代表  一个皿，另5个加一起代表第二皿， 两 ...

那试验组的菌怎么加啊，要先把菌和样品加稀释剂混合后在注入培养基。

昊昊均均01

试验组制备：取9.9ml 供试液中加入0.1ml 菌悬液，从含菌的供试液中取样进行平皿法

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guwei

要么加大稀释级，要么换个方法。

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简单～～幸福

薄膜过滤不行的话可以改为平皿法，也可以一张滤膜少过一点，多过几张滤膜加起来

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门门

九九emj 发表于 2023-2-9 20:58
那试验组的菌怎么加啊，要先把菌和样品加稀释剂混合后在注入培养基。

你问得对。我错了，不是1ml分成5份，而是 5份每份都是1ml，把前面加大稀释，然后靠多皿把稀释的倍数再降回来，这样防止没法判定结论。
试验组不需要弄10个皿，仅2个取平均即可。
给你个方法例子：取本品10g，加含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至500ml，使供试品分散均匀，制成1:50的供试液。取1:50的供试液1ml，置含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml中，即为1:500的供试液。
需氧菌总数   取1:500的供试液1ml，注皿，平行5份，合并计数，依法检查（中国药典通则1105）。
实际供试品是要做10皿的，因为要平均（5个的和相当于最平常法的1个）,
这样检验如果没长菌，最终结果是
＜100cfu，
如果每个皿长了1个，
那么最终结果是（5+5）/2=5，结果500cfu。这样能算明白吧，如果合格标准是1000cfu那么还有些余地。
试验组咋做的需要想想：把不大于50000个菌放到500ml里即可达到 要求（每ml不大于100cfu）。
所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%，那么加不超过5ml即可，比如加5ml（5000~10000cfu/ml，这种规格的菌球能直接买到或者自己稀释也不难）的菌液即符合要求。
过程就是这样，我应该没算错吧？如有计算错误，你自己修正啊，算得费脑子！

信苏

换膜，滤膜有不同材质

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九九emj

信苏 发表于 2023-2-23 20:05
换膜，滤膜有不同材质

您的意思我了解，可是买的是一次性滤杯，不大好换膜，我们自己也尝试过水系，有机系也是滤不下去。

九九emj

门门 发表于 2023-2-23 18:59
你问得对。我错了，不是1ml分成5份，而是 5份每份都是1ml，把前面加大稀释，然后靠多皿把稀释的倍数再 ...

有道理啊，感谢您的留言，我这边来看能否好实现。

超甜

昊昊均均01 发表于 2023-02-13 20:19
试验组制备：取9.9ml 供试液中加入0.1ml 菌悬液，从含菌的供试液中取样进行平皿法

是所以菌加完平皿法，还是一个菌加了马上平皿法

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