“CGT每日一问”：Q48 细胞治疗APS细节问题探讨

姣妹崽

关于细胞治疗无菌工艺模拟验证的若干问题探讨：

问题1：从第1天血液复苏到第7天细胞分选，是否可以合并到1天模拟，还是按正常生产工艺每天去模拟，正常生产每天要将使用的耗材传入隔离器，然后对隔离器和耗材进行VHP灭菌。

问题2：是否需要考虑人员疲劳因素，对无菌操作的影响，模拟各工序最长时限，比如第2天最长生产时限在8小时左右（操作+取样+检验等待）。

问题3：新生产线，首次模拟，是否主要生产人员要模拟3次从第1天到第7天的全部开口操作，还是模拟1次即可。辅助操作风险较低（传递物品，递送物品，摆放环境监测菌碟）辅助人员模拟1次即可。

问题4：APS过程中有很多取样操作（取样测细胞密度、活率、装量、无菌等），为了考察取样过程不会污染产品，大家有对所有样品取足够量，然后送到QC培养14天看是否长菌吗？

天真agk

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依然飘雪12

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姣妹崽

摘自《细胞治疗产品生产质量管理指南（试行）》生产管理：
细胞产品、直接用于细胞产品生产的基因修饰载体或其他赋予其特定功能的材料的无菌工艺模拟试验至少应当符合以下要求：
1.采用非密闭系统进行无菌生产操作的，无菌工艺模拟试验应当包括所有人工操作的暴露工序。
2.采用密闭系统进行无菌生产操作的，无菌工艺模拟试验应当侧重于与密闭系统连接有关的步骤；如有未模拟的无菌生产操作，应当进行风险评估，并书面说明不开展无菌工艺模拟的合理性。
3.需要较长时间完成的无菌生产操作，应当结合风险评估，说明缩短模拟某些操作（如离心、培养）时长的合理性。
4.对微生物生长有抑制作用从而可能影响无菌工艺模拟试验结果的无菌生产操作（如冻存），经风险评估后可不包含在无菌工艺模拟试验中。
5.同一生产区域有多条相同生产线的，每条生产线在成功通过无菌工艺模拟试验的首次验证后，可采用极值法或矩阵法，或两者联用的方法，至少每班次半年进行1次无菌工艺模拟试验，每次至少一批。
使用相同设备和工艺步骤生产不同的产品，如采用极值法进行无菌工艺模拟试验，应当模拟某些生产操作的最差条件；如采用矩阵法进行无菌工艺模拟试验，应当模拟相似工艺步骤的最差条件；如采用两者联用方法的，应当书面说明理由及其合理性，模拟应当包括所有的无菌生产操作及最差条件、所有生产用的设备类型。

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关于细胞治疗无菌工艺模拟验证的若干问题探讨：

问题1：从第1天血液复苏到第7天细胞分选，是否可以合并到1天模拟，还是按正常生产工艺每天去模拟，正常生产每天要将使用的耗材传入隔离器，然后对隔离器和耗材进行VHP灭菌。

建议：可以的，需要涵盖所有生产工艺的操作，风险评估确定开口操作的次数，包括耗材传入隔离器的次数，VHP灭菌次数。如果VHP灭菌次数多，可能不能在一天内完成。

问题2：是否需要考虑人员疲劳因素，对无菌操作的影响，模拟各工序最长时限，比如第2天最长生产时限在8小时左右（操作+取样+检验等待）。
建议模拟一天最长工作时间，包括整个生产工艺操作中的最大次数（操作、取样、检验相关）


问题3：新生产线，首次模拟，是否主要生产人员要模拟3次从第1天到第7天的全部开口操作，还是模拟1次即可。辅助操作风险较低（传递物品，递送物品，摆放环境监测菌碟）辅助人员模拟1次即可。
建议：看阶段，如果临床一期，可以一次，最好三次。临床后期，肯定三次。

问题4：APS过程中有很多取样操作（取样测细胞密度、活率、装量、无菌等），为了考察取样过程不会污染产品，大家有对所有样品取足够量，然后送到QC培养14天看是否长菌吗
答：是的。

gin

1. 可以合并，但未必是1天，7天的话培养基促生长实验可能过不去，我记得以前培养基敞口放置4-5天水分就不行了。关键点是合并后干扰的模拟如何做到最差条件，需把干扰操作逐条列出并通过风险评估确定最差条件。
2. 班次和时间是APS的关键因素之一，需模拟最差条件。但这跟人员疲劳其实没太多相关性，主要是工序的暴露时间，特别是在B+A的情况下。如果你用了隔离器，人员疲劳对无菌条件影响可能更小，隔离器自身的密封性以及内部无菌环境的保持能力才有关键影响。
3. 新生产线，首次模拟肯定需要3批，但人员是否需要3批才能有资质，可能取决于公司资深规定，我记得没硬性规定。
4. 如果是CGT品种的样品，因为CGT灌装规模远小于传统无菌制剂，且无最终过滤的步骤，是一个无菌组件的无菌装配过程，在APS时，理论上所有样品均需考察无菌，且取样体积需达到无菌检测样品的要求，除非特殊情况，部分样品如果在产品生产工艺过程中处理并不要求无菌的，可能引入假阳性风险的，我觉得可以通过风险评估排除掉。

姣妹崽

gin 发表于 2024-5-30 10:48
1. 可以合并，但未必是1天，7天的话培养基促生长实验可能过不去，我记得以前培养基敞口放置4-5天水分就不行 ...

问题1：如果不是合并到1天，只有增加1天，是不是就得换液，应该不存在培养基促生长实验受影响的问题
问题4：取样体积是一个大问题，如果所有样品都考察无菌，模拟到最后还有没有产品哦

gin

姣妹崽 发表于 2024-5-31 11:05
问题1：如果不是合并到1天，只有增加1天，是不是就得换液，应该不存在培养基促生长实验受影响的问题
问 ...

增加一天不用考虑换液。4这个问题APS中不存在，以自体CART为例，培养体系基本上是1L-2L体系，产品生产存在体积问题是因为细胞工艺在最后会有浓缩步骤，去掉培养基上清液（这部分也是细胞工艺中可以替代产品无菌培养法样品的），但在APS中是没有这个问题，体积还是1L-2L，且过程取样并不是那么多，培养过程就算7-8天，每次取样液也就1ml，APS中就算按最差条件去取样，大概也就十几毫升的样子，不会影响成品模拟物。所有样品考虑无菌的一个必要点是批次量，传统APS现在都要求1万瓶每批了，细胞治疗APS如果只看最后一袋成品或者几管成品的无菌，批次量的代表性是个很大的问题，因为细胞治疗本身工艺是无菌组件的无菌组装，严格来说整个过程样品都应视为无菌，不能只看最终成品。而且细胞治疗产品的APS一般要求，最后灌装完成品剩余的培养基应全部培养且看无菌结果。