中药饮片的分析方法验证和确认

雪莲12345

中药材检验分析方法的验证，要做药典方法陈皮，含量约5%。【检测方法】：色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（22：78）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。　　对照品溶液的制备  取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。　　供试品溶液的制备  取本品粗粉（过二号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W；频率40kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 这种的做回收率要怎么设计方案呀？是按80%，100%，120%，供试品制备时准备9份0.2g的样品，然后3份加8mg橙皮苷，再3份加10mg橙皮苷，最后3份加12mg橙皮苷吗？

求各位大佬解惑

紫宵

加这么多的吗

雪莲12345

紫宵 发表于 2024-5-8 10:22
加这么多的吗

我是这么计算的：0.2g陈皮的橙皮苷的量大概是10mg，如果照指导方法的80%、100%、120%来计算就是加这么多橙皮苷，但是我又觉得不对！太费对照品啦！！

紫宵

雪莲12345 发表于 2024-5-9 07:46
我是这么计算的：0.2g陈皮的橙皮苷的量大概是10mg，如果照指导方法的80%、100%、120%来计算就是加这么多 ...

你这样确实费
按你这个思路的话，我建议你啊，你这个是0.2g到25ml对不对，你对照品配一种浓度就可以了，然后和供试品溶液按比例混合到你想要的比例，少配点

loveaysl

药典方法做确认不就好了，做回收率干嘛。
做加标的话，加标后的测定值一般不应超出方法的测定上限的90%，这个做线性范围时注意一下；
当样品中待测物浓度高于校准曲线的中间浓度时，加标量应控制在待测物浓度的半量。可以选10%，30%，50%做加标

huhu

药典方法做方法确认就可以了吧？不用全面验证

雪莲12345

loveaysl 发表于 2024-5-11 14:54
药典方法做确认不就好了，做回收率干嘛。
做加标的话，加标后的测定值一般不应超出方法的测定上限的90%， ...

我知道，按GMP的话只要确认就行，但是公司有个项目要求要做一个，所以才来问的，以前从来没做过，参考的资料也都是化药的，感觉化药的好简单！选择10%、30%、50%的操作，大概是0.2g样品，各加对照品1mg、3mg、5mg吗？或者我可以配制1mg/ml的橙皮苷对照品溶液，然后各加1ml、3ml、5ml？

雪莲12345

“可用已知纯度的对照品进行加样回收率测定，即向已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。在加样回收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。”就最后一句话不好把握

loveaysl

雪莲12345 发表于 2024-5-25 17:04
我知道，按GMP的话只要确认就行，但是公司有个项目要求要做一个，所以才来问的，以前从来没做过，参考的 ...

严格来说都是称取，模拟样品提取过程，中药申报审核不太严的话用对照品母液做也没问题的