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蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者»蒲公英论坛 › 特色＆热点 › 有问有答 › 纯化水检测
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[无菌&限度检查] 纯化水检测

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沁t60yr360
发表于 2024-10-18 08:32:34 | 显示全部楼层 |阅读模式

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各位大佬求解一下，纯化水微生物限度检测时，先用缓冲液20-30ml润湿滤膜，这里的缓冲液指的是？？？
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琦瑞福生
药生
发表于 2024-10-18 08:39:18 | 显示全部楼层
用灭过菌的纯化水就行
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沁t60yr360
 楼主| 发表于 2024-10-18 08:50:42 | 显示全部楼层
琦瑞福生 发表于 2024-10-18 08:39
用灭过菌的纯化水就行

好的谢谢，可以用121度高压蒸汽灭菌来灭菌嘛。

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田园小草
记得阴性对照也是如此操作，避免挑战  详情 回复 发表于 2024-10-18 15:46
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猫星人
药徒
发表于 2024-10-18 08:51:47 | 显示全部楼层
缓冲液通常是无菌的生理盐水（如0.9%的氯化钠溶液）
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八档丶电风扇
药徒
发表于 2024-10-18 08:59:27 | 显示全部楼层
0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液都行，看你方法验证里用的什么
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沁t60yr360
 楼主| 发表于 2024-10-18 09:14:00 | 显示全部楼层
问一下，纯化水验证，纯化水抑菌性很微小，有说要做验证方案的，也有说不做也行，那就直接按药典上取纯化水1ml，经过薄膜过滤法然后培养观察结果就可以了嘛？？？

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琦瑞福生
直接1ml会不匀，前面加缓冲液是为了润湿铺平膜，后面你还要冲洗，为了把残留在杯壁上的液体冲下去 一般都在方法开发阶段进行，无论是PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液还是灭过菌的纯化水，只要你做了方法开发，一般不  详情 回复 发表于 2024-10-18 09:24
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Jpz77n2yf
药徒
发表于 2024-10-18 09:22:06 | 显示全部楼层
沁t60yr360 发表于 2024-10-18 09:14
问一下，纯化水验证，纯化水抑菌性很微小，有说要做验证方案的，也有说不做也行，那就直接按药典上取纯化水 ...

验证该做还是要做，不能省，至于取样量，药典说是至少1ml对吧，建议多一点，比如2ml、5ml，太少不具备代表性
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琦瑞福生
药生
发表于 2024-10-18 09:24:32 | 显示全部楼层
沁t60yr360 发表于 2024-10-18 09:14
问一下，纯化水验证，纯化水抑菌性很微小，有说要做验证方案的，也有说不做也行，那就直接按药典上取纯化水 ...

直接1ml会不匀，前面加缓冲液是为了润湿铺平膜，后面你还要冲洗，为了把残留在杯壁上的液体冲下去

一般都在方法开发阶段进行，无论是PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液还是灭过菌的纯化水，只要你做了方法开发，一般不会有人挑战

点评

田园小草
首先做肯定是要做的，取1ml也行，但是不推荐，铺不平，所以先加入缓冲液，过滤同时浸润膜表面，你要知道一点，微生物用到的过滤膜，不是筛子那样一个个空洞，更是多层树叶经脉那样的网状结构堆叠而成，没有首次的浸  详情 回复 发表于 2024-10-18 16:30
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奔向远方
药徒
发表于 2024-10-18 09:28:28 | 显示全部楼层
我们之前遇到检查老师，说纯化水微限样品量1ml太少，后来改成了10ml，冲洗液用的是PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液

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shixinyun
取样10ml的前提是你们微生物控制比较好，如果微生物本身控制不够好，可以考虑2ml或5ml，否则培养皿都长满了，会导致QC微生物计算困难~  发表于 2024-10-18 10:45
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沁t60yr360
 楼主| 发表于 2024-10-18 09:45:26 | 显示全部楼层
如果做验证，那一般取几个梯度稀释比较合适

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田园小草
一般情况下，做一个10ml足够了  详情 回复 发表于 2024-10-18 15:49
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cuizhu_856
发表于 2024-10-18 14:40:24 | 显示全部楼层
沁t60yr360 发表于 2024-10-18 09:45
如果做验证，那一般取几个梯度稀释比较合适

纯化水本身菌量少的话不用稀释啊，还得增加检验量呢，1ml、10ml、20ml……看你们哪个量能检出来
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田园小草
药生
发表于 2024-10-18 15:46:40 | 显示全部楼层
沁t60yr360 发表于 2024-10-18 08:50
好的谢谢，可以用121度高压蒸汽灭菌来灭菌嘛。

记得阴性对照也是如此操作，避免挑战
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田园小草
药生
发表于 2024-10-18 15:49:42 | 显示全部楼层
沁t60yr360 发表于 2024-10-18 09:45
如果做验证，那一般取几个梯度稀释比较合适

一般情况下，做一个10ml足够了
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田园小草
药生
发表于 2024-10-18 16:30:09 | 显示全部楼层
琦瑞福生 发表于 2024-10-18 09:24
直接1ml会不匀，前面加缓冲液是为了润湿铺平膜，后面你还要冲洗，为了把残留在杯壁上的液体冲下去

一 ...

首先做肯定是要做的，取1ml也行，但是不推荐，铺不平，所以先加入缓冲液，过滤同时浸润膜表面，你要知道一点，微生物用到的过滤膜，不是筛子那样一个个空洞，更是多层树叶经脉那样的网状结构堆叠而成，没有首次的浸润，很容易就出现缝隙过大，微生物直接过滤，然后第二次加入一定量个缓冲液，同时加入1ml纯化水，过滤，其实后面也没有冲洗的必要了，不过这里第二次还是推荐直接10ml纯化水，不加缓冲液过滤，简单有效，但是需要注意一点，验证怎么做的实际怎么做，同样的样品怎么做的，阴性怎么做
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沁t60yr360
 楼主| 发表于 2024-10-22 09:12:23 | 显示全部楼层
那如果我取纯化水10ml,缓冲液90ml过滤，那我的阴性对照也是取灭菌的纯化水10ml缓冲液90ml还是直接取灭菌纯化水100ml或者缓冲液100ml来做对照。
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沁t60yr360
 楼主| 发表于 2024-10-22 09:15:57 | 显示全部楼层
田园小草 发表于 2024-10-18 16:30
首先做肯定是要做的，取1ml也行，但是不推荐，铺不平，所以先加入缓冲液，过滤同时浸润膜表面，你要知道 ...

那如果我取纯化水10ml,缓冲液90ml过滤，那我的阴性对照也是取灭菌的纯化水10ml缓冲液90ml还是直接取灭菌纯化水100ml或者缓冲液100ml来做对照。

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田园小草
其次，10ml足够的铺平滤膜了，只要你验证也这么做了，不用加缓冲液 同时阴性还是100ml缓冲液，虽然实际样品没用缓冲液 阴性你可以用200，300ml缓冲液，这只会证明你的缓冲液是无菌有效的，但是必须遵循一点，  详情 回复 发表于 2024-10-22 11:25
田园小草
阴性，100ml缓冲液  详情 回复 发表于 2024-10-22 11:22
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田园小草
药生
发表于 2024-10-22 11:22:19 | 显示全部楼层
沁t60yr360 发表于 2024-10-22 09:15
那如果我取纯化水10ml,缓冲液90ml过滤，那我的阴性对照也是取灭菌的纯化水10ml缓冲液90ml还是直接取灭菌 ...

阴性，100ml缓冲液
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田园小草
药生
发表于 2024-10-22 11:25:01 | 显示全部楼层
沁t60yr360 发表于 2024-10-22 09:15
那如果我取纯化水10ml,缓冲液90ml过滤，那我的阴性对照也是取灭菌的纯化水10ml缓冲液90ml还是直接取灭菌 ...

其次，10ml足够的铺平滤膜了，只要你验证也这么做了，不用加缓冲液

同时阴性还是100ml缓冲液，虽然实际样品没用缓冲液

阴性你可以用200，300ml缓冲液，这只会证明你的缓冲液是无菌有效的，但是必须遵循一点，和验证一致
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沁t60yr360
 楼主| 发表于 2024-10-22 16:06:36 | 显示全部楼层
田园小草 发表于 2024-10-22 11:25
其次，10ml足够的铺平滤膜了，只要你验证也这么做了，不用加缓冲液

同时阴性还是100ml缓冲液，虽然实 ...

再问一下，验证的话，我也取纯化水10ml过滤，阴性对照取100ml缓冲液这样和实验一致嘛。还是需要多取几个参数，比如取纯化水1ml,10ml,20ml各自做一次试验和相应的阴性对照试验，最后比对结果选者那个参数合适，比如选者10ml合适，确定以后的纯化水微生物限度检测都是用10ml纯化水来做，这个思路对吗？？
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沁t60yr360
 楼主| 发表于 2024-10-22 16:07:15 | 显示全部楼层
再问一下，验证的话，我也取纯化水10ml过滤，阴性对照取100ml缓冲液这样和实验一致嘛。还是需要多取几个参数，比如取纯化水1ml,10ml,20ml各自做一次试验和相应的阴性对照试验，最后比对结果选者那个参数合适，比如选者10ml合适，确定以后的纯化水微生物限度检测都是用10ml纯化水来做，这个思路对吗？？

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田园小草
一般不推荐不是10梯度进行实验，比如你提到的20，不方便计算 其实无法直接推出你验证到底用1，10，还是100，这完全取决于你们的水系统，能做100当然最好啦，但是无论取样多少，都要方便你的最终计数，每皿菌落要  详情 回复 发表于 2024-10-22 16:56
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