间接血凝抗体检测

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2%致敏绵阳红细胞怎么制备？鞣酸化后自凝了怎么回事

机智鼠

间接血凝抗体检测是一种常用的免疫学检测方法，用于检测患者体内是否存在特定的抗体。在制备2%致敏绵阳红细胞时，需要先将绵阳红细胞与相应的抗原进行反应，使其表面结合上抗原分子。然后加入抗人球蛋白血清，使之与绵阳红细胞上的抗原-抗体复合物结合。最后加入适量的鞣酸溶液，使绵阳红细胞发生自凝现象。

如果鞣酸化后自凝了，可能是由于以下原因：

  1. 鞣酸浓度过高或过低；

  2. 反应时间过长或过短；

  3. 温度不适宜；

  4. 其他因素干扰了反应过程。建议重新调整实验条件并重复实验以获得准确的结果。

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鬼使神差

以下是2%致敏绵羊红细胞的一般制备方法以及鞣酸化后自凝可能的原因分析：

2%致敏绵羊红细胞的制备：

首先是绵羊红细胞的采集与洗涤。采集绵羊静脉血，放入含抗凝剂（如阿氏液）的无菌容器中。用适量生理盐水洗涤红细胞，通常以2000 - 3000转/分钟离心5 - 10分钟，弃去上清液，重复洗涤3 - 4次，直到上清液无色透明，以去除血浆成分和其他杂质。

接着配制红细胞悬液。将洗涤后的绵羊红细胞用生理盐水配制成2%的红细胞悬液。可以通过准确吸取一定量的红细胞沉淀，再加入适量生理盐水来达到所需浓度，一般使用血细胞计数板或其他细胞计数方法进行准确计数和调整。

然后进行鞣酸化处理。取适量2%绵羊红细胞悬液，加入一定浓度的鞣酸溶液（如1:20000 - 1:40000的鞣酸生理盐水溶液），轻轻混匀，在37℃下孵育10 - 15分钟，使红细胞表面被鞣酸处理，鞣酸可使红细胞表面蛋白质变性，增加其与抗原或抗体结合的能力。

最后是致敏。鞣酸化处理后，再次离心洗涤红细胞，然后加入适量特异性抗体（或抗原，根据实验目的而定），在37℃下孵育30 - 60分钟，使抗体（或抗原）结合到红细胞表面，制备成致敏绵羊红细胞。孵育结束后，用生理盐水洗涤数次，去除未结合的抗体（或抗原），最后用生理盐水将致敏红细胞悬液调整至2%的浓度备用。

鞣酸化后自凝的原因：

鞣酸浓度过高可能会过度修饰红细胞表面蛋白质，改变红细胞表面电荷，减小红细胞之间的静电排斥力，导致自凝。

孵育温度和时间不当也会引起自凝。温度过高或时间过长会使红细胞表面蛋白质过度变性，破坏红细胞正常结构和表面特性，增加黏附性；温度过低或时间过短则可能导致鞣酸化不完全，影响红细胞稳定性，增加自凝可能性。

红细胞本身的质量问题也有影响。采集的绵羊红细胞若保存不当、放置时间过长或本身存在质量问题（如部分红细胞破裂、老化等），鞣酸化处理时更容易自凝。

溶液的pH值和离子强度不合适也会导致自凝。不合适的pH值或离子强度会改变红细胞表面电荷分布和蛋白质构象，使红细胞容易聚集，例如pH值偏离红细胞等电点过远，会减少红细胞表面电荷，促进自凝。

操作不当也是原因之一。鞣酸化过程中，操作过于剧烈，如过度振荡或搅拌，可能机械性损伤红细胞，使其表面结构破坏，引发自凝。另外，离心速度和时间不合适，也可能使红细胞受到过度挤压或损伤，增加自凝风险。

杰53ec9352

谢谢您那。不好做呐，鞣化时条件比较多，比如鞣化时间，洗涤PBS的浓度等