方法确认

阿平1

我公司有一个糖浆剂，做方法确认时回收率实验时，发现对照品不溶与水，请问这个回收率实验还怎样继续？回收率实验的供试品溶液制备方法如下：
取已知含量的本品1批，计算出25ml本品中含石吊兰素的量，配制相应的低、中、高标准溶液（溶剂：水），使每25ml低、中、高标准溶液中所含石吊兰素的量与25ml本品所含石吊兰素的量比例分别约为0.5:1，1.0:1，1.5:1。取本品，分别精密吸取25ml于9个分液漏斗中。在编号为①、②、③的分液漏斗中精密加入低浓度标准溶液25ml，摇匀；在编号为④、⑤、⑥的分液漏斗中精密加入中浓度标准溶液25ml，摇匀；在编号为⑦、⑧、⑨的分液漏斗中精密加入高浓度标准溶液25ml，摇匀；精密吸取本品约50ml在编号为⑩（本底）的分液漏斗中。用乙酸乙酯振摇提取3次（30ml、30ml、20ml），合并提取液，蒸干，残渣用50%甲醇溶解，移至25ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

机智鼠

针对对照品不溶于水的问题，建议调整溶剂体系或采用适宜的助溶技术。根据《中国药典》通则及ICH相关指导原则，回收率试验需确保对照品在供试品溶液制备过程中完全溶解且稳定。可考虑以下方案：

1. **更换溶剂**：若石吊兰素在水中溶解度低，可改用其易溶的有机溶剂（如乙醇、甲醇）或混合溶剂（如50%乙醇），但需评估溶剂对样品基质的影响及与后续检测方法的兼容性。参考《中国药典》凡例中“溶剂选择应不影响测定且与样品特性相符”的要求。

2. **助溶措施**：
   - **加热/超声**：在不破坏成分的前提下，通过加热或超声促进溶解（需验证稳定性）；
   - **pH调节**：若成分呈弱酸性/碱性，可尝试调节溶剂pH以增加溶解度；
   - **添加助溶剂**：如少量表面活性剂（需确认不干扰测定）。

3. **调整制备流程**：  
   若原方法中乙酸乙酯提取后残渣需用50%甲醇溶解，可尝试直接将对照品先溶于50%甲醇，再按比例加入水相体系，避免水中溶解困难。需同步考察对照品在混合溶剂中的稳定性及空白干扰。

4. **方法验证**：  
   变更溶剂后，需重新验证线性、精密度及回收率，确保方法可靠性。参考《药品检验标准操作规程》中“方法验证应覆盖所有变更条件”的要求。

**依据**：  
- 《中国药典》通则0101“药品质量标准分析方法验证指导原则”  
- ICH Q2(R1)“分析方法验证：文本及方法论”  
- FDA《生物分析方法验证指南》中关于回收率试验的溶剂适用性要求  

建议优先评估溶剂替换对提取效率及检测结果的影响，确保方法专属性与准确性。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

天蓝雪

你样品溶液提取完用甲醇水溶解，那对照品不能也是甲醇水或者纯甲醇溶解吗，一定得是水溶？

阿平1

机智鼠 发表于 2025-6-20 08:12
针对对照品不溶于水的问题，建议调整溶剂体系或采用适宜的助溶技术。根据《中国药典》通则及ICH相关指导原 ...

根据查询的资料，石吊兰素溶于5% Na₂CO₃、KOH 或 NaOH 溶液；略溶于氯仿；微溶于甲醇、乙醇及乙酸乙酯；极微溶于乙醚；不溶于水。我们这个品种的pH值是弱酸性，如果加碱助溶的话，势必会改变溶液的pH值，而且在碱性溶液中的溶解度大于乙酸乙酯，后面用乙酸乙酯可能就提取不出来了；加不同比例的醇助溶的话，在醇和乙酸乙酯的溶解度相当的话，也不一定能提取出来。不管加碱还是加醇助溶，都改变溶液的属性，这个方法确认做下来，检查老师是否认可？

阿平1

天蓝雪 发表于 2025-6-20 08:50
你样品溶液提取完用甲醇水溶解，那对照品不能也是甲醇水或者纯甲醇溶解吗，一定得是水溶？

加水溶解时为了保证加入的溶剂与样品本身溶剂保持一致，以保证后续的顺利提取，如果加其他溶剂溶解的话，势必会改变样品的基质（本来基质只有水，加其他溶剂溶解对照加入后，基质就变成水+其它溶剂了），这样是不是还要在去做验证？