关于纯化的有些问题，我是外行人知道个大概就好啦

well_done

1.

CHT层析、流穿CHT层析了之后，又进行了CHT流穿？这是啥意思，或者说层析和流穿不是一个意思？流穿是啥意思？

2.DTT解聚/重组装

通过加入DTT的蛋白液解聚，然后在经过中空纤维之后重新组装？达到除去某物质的作用？

邵帅

是翻译没翻译准确吧？
1# 没太看明白啥意思
2# 应该是蛋白质用DTT打断2S键 然后用纤维柱复性吧

wanggui_929

看不懂的飘过
...

枫子

不懂，等高手回复学习

well_done

邵帅 发表于 2015-4-2 12:34
是翻译没翻译准确吧？
1# 没太看明白啥意思
2# 应该是蛋白质用DTT打断2S键 然后用纤维柱复性吧

其实就是想问，流穿是啥意思？

well_done

邵帅 发表于 2015-4-2 12:34
是翻译没翻译准确吧？
1# 没太看明白啥意思
2# 应该是蛋白质用DTT打断2S键 然后用纤维柱复性吧

CHT只是一种柱子的名称

邵帅

well_done 发表于 2015-4-2 13:36
其实就是想问，流穿是啥意思？

流穿一般就是指 待分离的样品组分通过层析柱而没有吸附I在上面-------一种原因是与固定相没有吸附作用或很小，而直接穿过层析柱。一种原因是上样量超出层析柱最大上样量， 超出部分直接通过层析柱。 这种流穿组分形成的信号峰 一般叫流穿峰

邵帅

well_done 发表于 2015-4-2 13:36
CHT只是一种柱子的名称

你是做什么产品的？

well_done

邵帅 发表于 2015-4-2 13:46
流穿一般就是指 待分离的样品组分通过层析柱而没有吸附I在上面-------一种原因是与固定相没有吸附作用或很 ...

那不吸附还直接通过层析柱的意义是什么呢？

邵帅

well_done 发表于 2015-4-2 14:11
那不吸附还直接通过层析柱的意义是什么呢？

有可能是杂质， 本就不希望他吸附

zhangchu

well_done 发表于 2015-4-2 14:11
那不吸附还直接通过层析柱的意义是什么呢？

这一步基本吸附的是杂质，流穿后的是好的样品

well_done

zhangchu 发表于 2015-4-3 10:56
这一步基本吸附的是杂质，流穿后的是好的样品

也就是说柱子吸的是杂质？

zhangchu

well_done 发表于 2015-4-3 12:48
也就是说柱子吸的是杂质？

不知道你是什么制剂。我简单地了解过纯化的几步工艺，阴离子交换是吸附杂质的

roc830725

个人理解，仅供参考
1）你用的是伯乐的羟基磷灰石填料，你样品应该加了一定量的磷酸钠，造成你目的蛋白不被柱子吸附，也就是目的蛋白流穿，杂蛋白因为和目的蛋白电荷性质不一样，被层析柱吸附，但一次纯化效果达不到理想要求，进行二次纯化，还是流穿层析柱。你的二次流穿液就会达到理想纯度。柱层析采用流穿方法有时比吸附方法更能达到纯化效果。
2）蛋白质存在于溶液中往往是以多聚体存在的，靠二硫键结合，加入一定量DTT，能够解离二硫键，还原成单体，这时分子量会成倍的减小，除去的某物质不发生变化，和单体蛋白分子量差异还很大，经过中空纤维柱，除去某物质，再去除DTT或DTT含量减少到某个量，目的蛋白又会重新组装。

521kaiyue

学习了，门外汉路过！