如何把液相做到“打游戏”

孙艳红

热爱是最好的老师，只有喜欢这个仪器，就会全身心地投入，所以工作就变成了乐趣，做液相也就象打游戏一样快乐

善变的云

不错不错，关键要热爱，要实践、要总结、要积累、才能熟能生巧啊

巴西木

3. 柱温箱必须配制。如欲经济，可购买国产柱温箱。-------------本人推荐天津奥特赛恩斯仪器有限公司的AT-950制冷加热色谱柱恒温。

四叶花

我们也是经常采用高比例的甲醇冲洗柱子，还浪费有机相，沐风老师说的有道理，，赶紧改。。。

xhf123456

学习一下，谢谢老师分享经验。

gx真武阁

感谢谢沐风老师分享宝贵经验

1122

16年，好厉害！！！

泡泡的忧伤

怒赞

wanggui_929

谢谢分享，学习了

hexiaohanyu

点赞，谢谢分享。

fangyuan5

这个游戏打的有点长。后面发现是2013年写的。
说了很多好像很有道理的操作方式，但是，有必要提醒下一般的操作工，特别是新手，不要去模仿。虽然我不做液相很多年了，凭记忆提出以下几个值得商榷的问题：
1、盐的析出问题
引用：“一、 水相中的溶质溶解方式
水相中需溶解的无机盐和表面活性剂等固体溶质，建议采用加热法，不建议采用振摇、超声等方式。因此种方式的溶解，溶质可能处于“临界胶团浓度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有机溶剂、温度剧降等），极易析出少量结晶；而一旦析出，便将损伤仪器和色谱柱，呈现泵头处析出“盐和白粉”的现象。”
盐的析出不在于溶解的方式，更多的是流动性配比不合适，还有比如试验温度太低、漏液后溶剂挥发等引起。
实际上，溶解方式最不建议的是加热方法，除非是归一化法。因为在定量检测中，定容是非常重要的，而加热法往往引文温度不能很快定容。
一般EP中都会用一个溶剂或溶液先溶解后，再加其他的组分配置而成。

2、流动相的有效期
“剩余流动相完全可继续使用，密封后放置阴凉处；待下次试验时与新配制的流动相混合后抽滤即可。无需担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题，这些皆为疑神疑鬼的表现。实践是检验真理的唯一标准！实践吧~”
这个确实是不一定可以的，以前实验室经常碰到，图谱不对，结果是用来了以前的流动相。
当然我也要说楼主还是非常聪明的，这里有个关键点是把旧的流动相加到新的流动相混合后抽滤使用。我不能说这样不行，但是作为一个药企，这样违反批号编制、有效期等规则的事情还是最好不要做。而且我要提醒一点的是，流动相不光光有发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题，还有可能长藻，长苔等问题。

3、色谱柱的安装
“三、 色谱柱的安装
标准SOP应为：取A管路放入流动相瓶中→拧松泵头→流速由0ml/min逐渐升至10ml/min，观察尾液是否呈瀑布状流出，持续10秒→拧紧泵头→流动相呈抛射状从安装色谱柱的一端喷出，观测是否呈抛物线状，持续5秒→流速逐步降至1.0ml/min →安装色谱柱，待20秒后，流动相从色谱柱另一端呈泉水状涌出再安装另一端→手握两端螺丝帽，拧紧。
以上安装顺序遵循的是：逐级排放气泡和仪器内存留的洗液，使得安装后气泡极难混入。本人曾试验梯度洗脱连续一周，第一针与最后一针主成分保留时间相差在6秒以内。”
对于这种繁琐的安装方式，我只能说：“难道我们使用的仪器相差这么大吗？你家的液相连一个小小的气泡都不能解决吗？那流动相本身产生的气泡，不是赶紧把柱子卸下来赶气泡？”

4、色谱柱的清洗
四、 试验后色谱柱的清洗
“1.2 水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时
先采用纯水（或含有2%甲醇），冲洗A管路（试验采用哪个管路，就要从头到尾冲洗该管路），时间30分钟（如流动相中有表面活性剂，适当增加时间），流速1.0ml/min，柱温可较试验温度高出5~10℃；随后更换成20%甲醇再冲洗30分钟，流速1.0ml/min，柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。
很多同仁其后采用高比例的甲醇冲洗，实属画蛇添足，导致残余的有机相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量盐和表面活性剂，从而在泵头上、色谱柱中析出，也导致了色谱柱寿命大为缩短。本人曾使用过一根约2000元的色谱柱，正着用了四年、倒着用了两年（倒着用测非有关物质）。”
我所知道的色谱柱能用纯水（或含有2%甲醇）清洗的真没几根，另外有些色谱柱这么贵，万把、6000以上的，如果给我洗没用一根，不知道老板会不会打死我？
现在色谱柱种类这么多，还是多看看说明书吧。

5、工作效率
“工作流程应如下进行：
(1) 0~2小时 配制流动相、对照品和供试品溶液等，切勿催促昨日试验同事。
(2) 2~3小时 采用A管路注入流动相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脱才用到B管路），平衡1小时。如流动相中有表面活性剂，建议前一晚小流速过夜，第二天上班后将流速增至1.0ml/min，平衡1小时后即可开始做试验。
(3) 3~5小时 测定空白溶剂，一定要做到基线不漂移后方可开始测定。所谓“不漂移”，通常系指以1.0%自身对照溶液主成分峰高约20%高度来设定的视野范围观察所得，切不可设定得过小，使得杂质峰显得很突兀、基线抖动得很厉害，弄得人很担心。
(4) 5~8小时 配制完所有样品，预试了对照溶液和供试品溶液，设定好自动进样程序，程序最后一针设定为小流速过夜，紫外灯关闭。切勿设定为切换至B管路洗脱，此举得不偿失。
(5) 9~24小时 放心回家，让仪器自动进样，除非不稳定的样品（配制一份测定一针）。充分利用下班后的16小时，做到从容不迫、镇定自若。如单位还无自动进样装置，建议向领导申请购买，因一台自动媲美三台手动。
(6) 第二天0~0.5小时 检查并计算昨晚试验结果，如发现不良记录，将流速增至1.0ml/min，平衡30分钟后，测定重新配制的该份样品即可（同时回校对照一针）。无需全部重新测定，不要过度谨小慎微。
(7) 第二天0.5~2.0小时 如上冲洗色谱柱，交给其后试验同事。”
如果把这样的工作顺序给老板讨论，会不会给我加奖金呢？
但是，必须要夸奖的的是进样完后不清洗，低流速到第2天，直至检查晚上的色谱图没有问题再清洗。必要的时候还是可以考虑这样安排的。

6、其他
比如柱温箱，以前就买来了也没办法，如果再购买液相，还配置一个国产的色谱柱，建议你们的QA经理给你讲讲仪器确认的事情，然后找你们老板讲讲牛都买来了，还要让人用手去牵牛鼻子。不光光是柱温箱，还有自动进样器的温控都要配置。
现在仪器的完整性要求很高，如果有出口欧盟、美国的还要考虑相应的操作软件。
建议QC多读读液相和柱子的说明书，很多内容都会有的。
产品使用的柱子最好专用，减少鬼峰出现率。
最后，现在设备越来越好了，也越来越贵了，建议老板给操作液相的QC加加工资，涨涨福利什么的，提高QC的归属感，每年降低的耗材可能都比增加的工资还高。

hzleiyu

学习了 谢谢分享哈

老孙头

值得我们好好学习

石头968

fangyuan5 发表于 2015-5-4 14:35
这个游戏打的有点长。后面发现是2013年写的。
说了很多好像很有道理的操作方式，但是，有必要提醒下一般的 ...

有讨论才有进步

huigenghao

赞同31楼的观点，还是要用发展的眼光去看问题。

fangyuan5

huigenghao 发表于 2015-5-5 11:01
赞同31楼的观点，还是要用发展的眼光去看问题。

谢谢赞同，你的鼓励就是我努力的动力。

liushuangyue999

不怎么懂的路过，学习一下。

蓝色星期六

"本人曾试验梯度洗脱连续一周，第一针与最后一针主成分保留时间相差在6秒以内。
"
"本人曾使用过一根约2000元的色谱柱，正着用了四年、倒着用了两年（倒着用测非有关物质）。
"
这两个经典，一个色谱柱用6年，节能降耗啊。

风落天涯

学习了,谢谢老师.

奇士

谢谢老师 我们公司去年已经学习过了。。。