液相色谱测定环丙沙星残留量，回收率怎么计算？

yilishanshan · 发表于 2016-4-16 23:11:40

欢迎您注册蒲公英

您需要登录才可以下载或查看，没有帐号？立即注册

x

液相色谱测定牛肉中环丙沙星残留量。做了一针未加标的牛肉，牛肉中不含环丙沙星。另做一针，称取牛肉2.0g，置于50ml离心管中，准确加25ug/ml 环丙沙星对照品100ul，再准确加入磷酸缓冲液20.00mL，漩涡振荡5分钟，离心5分钟。用刻度吸管取5.00mL处理好的牛肉提取液上固相萃取柱（柱子用6ml甲醇、6ml水活化），用5mL水先洗脱杂质，将固相萃取小柱抽干，最后用2mL流动相洗脱环丙沙星，洗脱液收集于5mL试管中。

环丙沙星对照：
50ng/ml 进样量10ul    峰面积  24

牛肉样品：
进样量10ul    峰面积73

样品浓度=对照品浓度*样品峰面积/对照品峰面积=50*73/24=152.08 ng/ml
测得量=样品浓度*稀释体积=样品浓度*洗脱体积/上样体积*提取液体积=152.08*2/5*20=1216.64  ng

加入量=25ug/ml *100ul=2.5 ug=2500 ng
回收率=测得量/加入量*100%=1216.64/2500*100=48.67%
请问大家，这样计算对吗？

lindayes · 发表于 2016-4-17 00:28:31

是的。对。

lindayes · 发表于 2016-4-17 08:25:54

回收率才48.67%,有点低

孙艳红 · 发表于 2016-4-17 08:27:56

计算正确

可亲可爱 · 发表于 2016-4-17 09:29:22

lindayes 发表于 2016-4-17 08:25
回收率才48.67%,有点低

可能提取有问题。

15816785816 · 发表于 2016-4-17 14:18:05

回收率低，主要还是净化的问题，过柱损失或没洗脱出来

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 14:38:31

要参加比赛，规定2个半小时，做3份牛肉加标样。所有实验方案都是严格规定得死死的，不能改变方案。用6ml甲醇、6ml水活化固相萃取柱子，上样5ml，5ml水洗，再用5ml流动相洗脱。
我也觉得回收率太低，不知道5ml牛肉提取液是不是超过了柱子最大载荷量。
如果用更多的流动相去洗脱环丙沙星，之后的溶液太稀，响应值太小，又需要用氮吹或者其他方式浓缩，这样多几步操作也可能再导致损失，回收率可能也不理想。

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 14:42:36

回收率太低，我估计关键在于固相萃取那一步。操作时，抽真空，通过旋转活塞控制流速，真不好控制呀，洗脱速度太快(2~3滴/秒)，回收率低，但洗脱速度太慢（1滴/秒），实验2.5小时又做不完。苦恼！

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 14:44:26

可亲可爱发表于 2016-4-17 09:29
可能提取有问题。

应该不是提取的问题，我测过牛肉，样品里没有环丙沙星残留。我是通过向不含环丙沙星的牛肉中，加入对照品来计算回收率的。
和提取是否完全应该没关系吧？

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 14:51:38

请问：如果进样不一样，怎么计算？
对照品：50ng/ml环丙沙星进样量20ul 峰面积89
牛肉样品：进样量10ul 峰面积708

牛肉中环丙沙星的浓度如何计算？样品峰面积要乘以2倍吗？
C=708*2*50/89=795.5ng/ml？

可亲可爱 · 发表于 2016-4-17 14:56:06

yilishanshan 发表于 2016-4-17 14:44
应该不是提取的问题，我测过牛肉，样品里没有环丙沙星残留。我是通过向不含环丙沙星的牛肉中，加入对照品 ...

就是的，你做的是加样回收率，如果不是提取方法的问题，怎么会这个回收率这么低呢？

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 15:59:20

可亲可爱发表于 2016-4-17 14:56
就是的，你做的是加样回收率，如果不是提取方法的问题，怎么会这个回收率这么低呢？

我所指的提取是在漩涡振荡5分钟，离心5分钟这一步。
牛肉中没有环丙沙星，而环丙沙星是我加入的单纯对照品，牛肉提取是否完全，环丙沙星都是在啊？
怎么会对环丙沙星的回收率有影响？

我觉得还是固相萃取柱净化。损失太大

可亲可爱 · 发表于 2016-4-17 16:03:32

yilishanshan 发表于 2016-4-17 15:59
我所指的提取是在漩涡振荡5分钟，离心5分钟这一步。
牛肉中没有环丙沙星，而环丙沙星是我加入的单纯 ...

如果方法没有问题，这个回收率也应当是比较恒定的，这也是没有关系的，计算的时候应当把回收率折算上的。

lindayes · 发表于 2016-4-17 16:35:31

上样量5mL的话，你选固相萃取小柱的柱体积是多少？我觉得应该5mL的柱子。

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 18:12:44

lindayes 发表于 2016-4-17 16:35
上样量5mL的话，你选固相萃取小柱的柱体积是多少？我觉得应该5mL的柱子。

学校买的固相萃取柱没有写清楚成分和ml数。但我一次性放不进5ml溶液，只能装3ml溶液左右。
比赛方案写的是要用HLB、60mg 3cc固相萃取柱。不太清楚这是什么意思？

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 18:13:19

lindayes 发表于 2016-4-17 16:35
上样量5mL的话，你选固相萃取小柱的柱体积是多少？我觉得应该5mL的柱子。

您好，再请教您一个问题:

如果进样不一样，怎么计算？
对照品：50ng/ml环丙沙星进样量20ul 峰面积89
牛肉样品：进样量10ul 峰面积708

牛肉中环丙沙星的浓度如何计算？样品峰面积要乘以2倍吗？
C=708*2*50/89=795.5ng/ml？

yilishanshan · 发表于 2016-4-17 18:15:08

可亲可爱发表于 2016-4-17 16:03
如果方法没有问题，这个回收率也应当是比较恒定的，这也是没有关系的，计算的时候应当把回收率折算上的。

哦，谢谢。做了几天，回收率忽高忽低，还不清楚怎么回事！发愁呢

lindayes · 发表于 2016-4-17 20:02:12

yilishanshan 发表于 2016-4-17 18:12
学校买的固相萃取柱没有写清楚成分和ml数。但我一次性放不进5ml溶液，只能装3ml溶液左右。
比赛方案写的 ...

你应该去查查这些萃取小柱不同单位的区别，根据自身的情况而选择合适的

lindayes · 发表于 2016-4-17 20:05:55

进样体积不同，那就是稀释倍数不一样了。看你取了多少体积，你先前不是取了5吗？现在把5ml换成你取样体积。

hicinswj · 发表于 2016-4-17 20:53:42

看看，学习一下

液相色谱测定环丙沙星残留量，回收率怎么计算？

欢迎您注册蒲公英

浏览过的版块