关于支原体检查

小飞鱼爱太阳 · 发表于 2016-7-6 15:56:15

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1、2015版药典中，检查支原体前会加入灭能小牛血清（培养基：血清为8:2）。
我想问的是为什么要加入血清？是因为支原体生长必须的营养物质？还是因为什么其他的原因？

2、支原体半流体培养基要加热冷却到56C,才能加入灭能小牛血清。
我想问的是为什么要冷却到56C？是不是因为低于56C半流体培养基会凝固？还是因为什么其他原因？？

3、判断支原体液体培养基染菌是看：颜色由枚红色变为黄色？？（我在网上查的想确定一下是不是）

4、判断半流体培养基是否染菌是看：培养基表面形成菌落？？？？（我在网上查的想确定一下是不是）

还请知道的老师指导！！~~~

轩大人amazing · 发表于 2016-9-29 10:21:40

56度考虑的是怕凝固了吧 ames中顶层培养基待用时会放在52±4℃的水浴中。所以应当目的一样的吧。

cnosema · 发表于 2016-7-7 05:41:30

什么是“灭能小牛血清”？不是灭活小牛血清？

1，应该是提供所需营养

2，温度太高，会破坏血清里的成分

3，应该是，因为产酸引起酚红变色

4，不清楚。不过半流体培养基，琼脂含量低一些，但基本也是液体的吧。如果想看表面，为啥不用固体呢？

cnosema · 发表于 2016-7-7 05:37:28

你用药典的方法，检测研发使用的材料，你等得起哈？

买个PCR试剂盒或者ELISA试剂盒吧，快太多了。

小飞鱼爱太阳 · 发表于 2016-7-7 08:41:00

cnosema 发表于 2016-7-7 05:41
什么是“灭能小牛血清”？不是灭活小牛血清？

1，应该是提供所需营养

做转种的时候要求用半流体培养基，半流体培养基里不加酚红，所以看不到颜色变化。那半流体的就只能看长不长菌落了？

小飞鱼爱太阳 · 发表于 2016-7-7 08:42:12

cnosema 发表于 2016-7-7 05:37
你用药典的方法，检测研发使用的材料，你等得起哈？

买个PCR试剂盒或者ELISA试剂盒吧，快太多了。

嗯，我再查查资料

cnosema · 发表于 2016-7-7 09:12:03

小飞鱼爱太阳发表于 2016-7-7 08:41
做转种的时候要求用半流体培养基，半流体培养基里不加酚红，所以看不到颜色变化。那半流体的就只能看长不 ...

只要你检测的不是正式产品，可以不完全按照药典规定走呀。反正你不算QC吧？

比如，酚红可以加呀，原理在那里呢

小飞鱼爱太阳 · 发表于 2016-7-7 09:33:29

cnosema 发表于 2016-7-7 09:12
只要你检测的不是正式产品，可以不完全按照药典规定走呀。反正你不算QC吧？

比如，酚红可以加呀，原理 ...

我们买的是已经装好管灭过菌的培养基，再加酚红还要重新灭菌？

cnosema · 发表于 2016-7-7 09:50:13

小飞鱼爱太阳发表于 2016-7-7 09:33
我们买的是已经装好管灭过菌的培养基，再加酚红还要重新灭菌？

你买的是现成的，当然就不容易加了。

要不，你把酚红配成100倍浓度或者更高浓度的，无菌过滤或者灭菌，然后加到买来的培养基里。配酚红时候，需要用合适缓冲液配或者生理盐水配哈

999666 · 发表于 2016-7-12 21:59:29

是在做支原体检测试剂盒吗？

cnosema · 发表于 2016-7-13 06:58:02

999666 发表于 2016-7-12 21:59
是在做支原体检测试剂盒吗？

是怀疑细胞培养瓶被支原体污染了

999666 · 发表于 2016-7-13 08:21:47

cnosema 发表于 2016-7-13 06:58
是怀疑细胞培养瓶被支原体污染了

直接买瓶支原体检测培养基就可以了，甚至可以通过变色时间来判断支原体类型

乌江鱼0108 · 发表于 2016-7-13 11:22:28

PCR试剂盒不是药典方法，而且不是所有支原体都能检测，用这个非药典方法行吗？另外，若用药典方法，验证中的阳性对照如何解决？药典方法中需要用到肺炎支原体，很难买吧？

轩大人amazing · 发表于 2016-9-13 09:43:26

检测的时候不需要提供阳性对照吗？

[药品研发] 关于支原体检查

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