细菌内毒素的检测

娓╄█ · 发表于 2020-5-29 09:48:25

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请教各位：1.细菌内毒素中的阳性凝胶反应现象能够保持多久算是正确的阳性反应呢？（因为我最近做了鲎试剂灵敏度复核试验，保温结束后拿出来观察，阳性管刚开始是明显的凝胶现象，但放置几分钟后凝胶就化了，这种现象算不算阳性反应呢，还是说如若为阳性管，凝胶是一直存在的？因为药典方法中说，保温或者拿取观察都需小心翼翼，否则会造成假阴性现象，所以我觉得我的实验现象应该是正常的？因为拿取观察后再放回去都对它产生了振动。但是我俩同事说的她们做的阳性管如若有凝胶是能保持的挺久的，特别是2λ的管，另一个同事我试验前告诉我的是需要在保温时间60分钟将将去观察，太早或太迟都会出现不凝胶的现象发生） 2.（假设我的凝胶反应是对的）我的复核反应中，阴性对照和0.25λ试验管都是阴性的，2λ管四只中有一只是阴性的其余三只是阳性的，这样试验有效性就不可信了。因为鲎试剂是已经过期了的，这个是否会影响这个本该阳性的结果？但是看着其它管的现象好像都挺正常的，就只有这只2λ管的不正常，我觉得鲎试剂影响应该不大，那还会有其他的什么原因吗？
请大家指点~谢谢

永恒12 · 发表于 2020-5-29 10:27:19

1是正常现象，2鲎试剂灵敏度复核不通过，这批次的鲎试剂不行哦

永恒12 · 发表于 2020-5-29 10:27:58

2λ的管必须是全阳性，0.25λ的管必须全是阴性

山顶洞人 · 发表于 2020-5-29 10:47:32

也可能是个别管试剂不行了。
凝结后融化，算阳性

娓╄█ · 发表于 2020-5-29 11:03:25

永恒12 发表于 2020-5-29 10:27
2λ的管必须是全阳性，0.25λ的管必须全是阴性

嗯嗯，这个我知道的，还有阴性对照管必须是阴性，这三个条件都满足才能证明这个复核试验有效

娓╄█ · 发表于 2020-5-29 11:25:39

永恒12 发表于 2020-5-29 10:27
1是正常现象，2鲎试剂灵敏度复核不通过，这批次的鲎试剂不行哦

emmmm，这个试验有效性存疑，我想着，应该也不能直接说这批次的鲎试剂灵敏度复核不通过，但如果是因为操作或者检查用水等器具的热源问题，这个又应该造成的是假阳性才对。会不会是由于标准品配制的时候，混合不均匀造成的呢？

永恒12 · 发表于 2020-5-29 13:11:11

娓╄█ 发表于 2020-5-29 11:25
emmmm，这个试验有效性存疑，我想着，应该也不能直接说这批次的鲎试剂灵敏度复核不通过，但如果是因为操 ...

排除法，逐项排除

娓╄█ · 发表于 2020-5-29 13:44:38

山顶洞人发表于 2020-5-29 10:47
也可能是个别管试剂不行了。
凝结后融化，算阳性

嗯嗯，我打算下周再找个时间再重新做一次以及干扰试验和检测试验。但是对MVD这些还有疑问：
1.这个最大有效稀释倍数的确定，是为了之后的试验中，我采用的供试品稀释倍数不超过MVD对吗？但是计算公式中的c不是已经规定了供试品浓度为1.0ml/mL或1.0mg/ml了吗？
2.还有供试品的细菌内毒素限值L有没有国家规定的标准呀？
3.我们公司的样品是原料药，sop上的限值是除客户规定外，限值为小于1.5EU/mg，按照公式，原料药的MVD取1，那供试品最小有效稀释浓度c=λ/L，意思是我在后续的试验中，供试品的浓度不小于计算出的那个c吗
求解答

老鸟 · 发表于 2020-5-30 07:25:59

问题1、你的规定来自哪里？发出来看看
问题2、注射剂一般限值为5EU，然后根据每日最大注射量进行计算
问题3、标准换算为溶液浓度，然后除于λ就是最大稀释倍数

来自苹果APP客户端

娓╄█ · 发表于 2020-6-1 09:03:45

老鸟发表于 2020-5-30 07:25
问题1、你的规定来自哪里？发出来看看
问题2、注射剂一般限值为5EU，然后根据每日最大注射量进行计算
问题3 ...

1.规定是药典1143 细菌内毒素检查法里的MVD=cL/λ公式下的说明那里，可能我理解错了吗，这个供试品浓度是注射剂的浓度？
2.好的，第二个问题我找到范例了，也谢谢您！
3.第三个问题我晓得最大稀释倍数怎么算，我的意思是，这个最大稀释倍数的意义在于检测时供试品浓度可以稀释，但稀释倍数不能大于MVD就行，即检测时的供试品浓度不能小于MVD对应的那个浓度就都可以？

像我这样的人1 · 发表于 2020-6-1 16:36:57

第一个问题你用来判断细菌内毒素的标准是什么，培养过成和拿取倒立都做到无干扰就行了，其它的就看它到了培养时间后的现象。不用纠结过了会又不凝之而阳性凝的很好之类的，只不过是它的内毒素量和阳性对照的多少问题。第二个鲎试剂灵敏度复核是你内毒素检测的前提，药典规定了判断标准，规定四支也有依据的。当然，这些判断的成立都要建立在你实验操作正确的情况下。细菌内毒素的调查也是从人机料法环去进行，从你怀疑的点是为何没有凝，那你就从稀释的准确性和取样仪器取样量的准确性这些方面去看，找到的可能性较大。另外，灵敏度复核结果也和细菌内毒素检查水和标准品有关，你可以逐一排查。或许用其它批的水它就合格了，我们是不管三者里换了哪个都做复核，批号一一对应着用，发现这个可以那个不可以情况比较少，偶尔有

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