微生物限度计数方法适用性验证。

pgypff

如何满足药典中的要求:1-接种量不大于100cfu，2-所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%，3-试验组中加入试验菌液，摇匀，使每1ml供试液中含菌量<100cfu。具体如何操作呢？请教各位，谢谢啦。

Apple1234567816

按比例稀释，一般是按10倍稀释，比如100ml供试品，加菌量不能超过1ml，那加1ml的10的4次方菌就能达到不超过100cfu/ml的要求，重点是你的菌液要准确稀释到10的4次方，这个需要经验。经费充足的话买定量菌株也可以。

yuansoul

努力达到

lilian2007177

分组，每组做10-20ml供试液，里边加100ul-200ul高浓度的菌液，含菌量10的4次方左右的就行；
具体给你推荐一下比如大肠埃希菌，培养后原液稀释10的负7次方大约是100cfu左右，然后你加10的负5次方的加到20ml供试液里混匀，大约每ml供试液里边就有几十个菌了

涂途7

老师，您可以加我微信：13736756736，打我电话也可以，我给您推荐定量菌株，符合药典规定，即拿即用。

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pgypff

Apple1234567816 发表于 2022-3-29 10:21
按比例稀释，一般是按10倍稀释，比如100ml供试品，加菌量不能超过1ml，那加1ml的10的4次方菌就能达到不超过 ...

老师您好。我最近做的是维生素c片（显酸性）微生物限度计数方法的适用性试验。
我的操作:
（需氧菌、霉菌酵母菌）用接种环刮取少许试验菌融入10ml0.9%氯化钠溶液→从中取1ml到9ml的氯化钠溶液【10-1】→依次稀释计数找出<10000cfu浓度的稀释级【如10-4】→从此菌悬液中取0.1ml到9.9ml供试品中【满足了要求2、3】，再从中取1ml到平皿中加TSA培养【满足了要求1】→再用同法做菌液对照组
（控制菌）从稀释计数找出的<1000cfu【即10-5】浓度的菌悬液中取0.1ml到0.9ml的供试品中，混匀后全部加入100mlTSB中培养【满足了要求1】→再用同法做菌液对照组。
结果:
（计数方法适用性试验中）供试品对照组、阴性对照组、试验组均无菌生长，菌液对照组长菌90个左右。
（控制菌检查方法适用性试验中）阴性对照组呈阴性，试验组和菌液对照组均为阳性。

问题:
1-计数中，为什么试验组不长菌？
2-如果VC片有抑菌性，为什么同样是接种量<100cfu，Vc对控制菌不抑，对需氧菌和霉菌抑呢？难道因为经过增菌培养了吗？

期待您的指教。

pgypff

Apple1234567816 发表于 2022-3-29 10:21
按比例稀释，一般是按10倍稀释，比如100ml供试品，加菌量不能超过1ml，那加1ml的10的4次方菌就能达到不超过 ...

老师你看一下，我的操作方法对吗？谢谢

pgypff

lilian2007177 发表于 2022-3-29 08:57
分组，每组做10-20ml供试液，里边加100ul-200ul高浓度的菌液，含菌量10的4次方左右的就行；
具体给你推荐 ...

老师您好。我最近做的是维生素c片（显酸性）微生物限度计数方法的适用性试验。
我的操作:
（需氧菌、霉菌酵母菌）用接种环刮取少许试验菌融入10ml0.9%氯化钠溶液→从中取1ml到9ml的氯化钠溶液【10-1】→依次稀释计数找出<10000cfu浓度的稀释级【如10-4】→从此菌悬液中取0.1ml到9.9ml供试品中【满足了要求2、3】，再从中取1ml到平皿中加TSA培养【满足了要求1】→再用同法做菌液对照组
（控制菌）从稀释计数找出的<1000cfu【即10-5】浓度的菌悬液中取0.1ml到0.9ml的供试品中，混匀后全部加入100mlTSB中培养【满足了要求1】→再用同法做菌液对照组。
结果:
（计数方法适用性试验中）供试品对照组、阴性对照组、试验组均无菌生长，菌液对照组长菌90个左右。
（控制菌检查方法适用性试验中）阴性对照组呈阴性，试验组和菌液对照组均为阳性。

问题:
1-计数中，为什么试验组不长菌？
2-如果VC片有抑菌性，为什么同样是接种量<100cfu，Vc对控制菌不抑，对需氧菌和霉菌抑呢？难道因为经过增菌培养了吗？

老师您看一下我的操作对吗？期待您的指教。

pgypff

lilian2007177 发表于 2022-3-29 08:57
分组，每组做10-20ml供试液，里边加100ul-200ul高浓度的菌液，含菌量10的4次方左右的就行；
具体给你推荐 ...

老师，也就是说先确定100cfu的稀释级，比如是10-7次方，然后去用10-5次方菌（10000cfu）去接种供试液，对吗？而且是10-5取0.2ml接种到20ml的供试液中，对吗？

pgypff

lilian2007177 发表于 2022-3-29 08:57
分组，每组做10-20ml供试液，里边加100ul-200ul高浓度的菌液，含菌量10的4次方左右的就行；
具体给你推荐 ...

老师您好。我最近做的是维生素c片（显酸性）微生物限度计数方法的适用性试验。 您帮我看一下我做的对吗。我的操作: （需氧菌、霉菌酵母菌）用接种环刮取少许试验菌融入10ml0.9%氯化钠溶液→从中取1ml到9ml的氯化钠溶液【10-1】→依次稀释计数找出<10000cfu浓度的稀释级【如10-4】→从此菌悬液中取0.1ml到9.9ml供试品中【满足了要求2、3】，再从中取1ml到平皿中加TSA培养【满足了要求1】→再用同法做菌液对照组 （控制菌）从稀释计数找出的<1000cfu【即10-5】浓度的菌悬液中取0.1ml到0.9ml的供试品中，混匀后全部加入100mlTSB中培养【满足了要求1】→再用同法做菌液对照组。 结果: （计数方法适用性试验中）供试品对照组、阴性对照组、试验组均无菌生长，菌液对照组长菌90个左右。 （控制菌检查方法适用性试验中）阴性对照组呈阴性，试验组和菌液对照组均为阳性。  问题: 1-计数中，为什么试验组不长菌？ 2-如果VC片有抑菌性，为什么同样是接种量<100cfu，Vc对控制菌不抑，对需氧菌和霉菌抑呢？难道因为经过增菌培养了吗？  期待您的指教。

Apple1234567816

pgypff 发表于 2022-3-29 21:27
老师您好。我最近做的是维生素c片（显酸性）微生物限度计数方法的适用性试验。
我的操作:
（需氧菌、霉 ...

请问，你们的供试品溶液有调pH吗？酸碱度对试验菌是有很大影响的。还要看一下加了菌以后有没有充分的混匀

依然星期三

买质控定量菌株

猫咪特工

按比例稀释即可

pgypff

Apple1234567816 发表于 2022-3-31 11:59
请问，你们的供试品溶液有调pH吗？酸碱度对试验菌是有很大影响的。还要看一下加了菌以后有没有充分的混匀

老师，能加您微信吗？这样交流更及时

pgypff

lilian2007177 发表于 2022-3-29 08:57
分组，每组做10-20ml供试液，里边加100ul-200ul高浓度的菌液，含菌量10的4次方左右的就行；
具体给你推荐 ...

老师能加您微信吗？这样交流更及时