课程问答 | 药物研发硬核武器之瞬时转染表达

小鹏1

Q&A | 药物研发硬核武器之瞬时转染表达

优化，成就与众不同

2022年5月18日，BLA系列课程，第六期《药物研发硬核武器之瞬时转染表达》，由奥浦迈抗体工程平台负责人丁玥博士授课，奥浦迈针对课程中收集的问题予以解答，供大家学习和探讨。

课程可在蒲公英药视网BLA专区进行免费回看

PC端：https://zyt.ouryao.com/plugin.php?id=yaoshi&a=lesson&cid=1957

手机端：

Q1：CHO细胞用PEI转染有优化吗，和原来的转染试剂盒相比，效果怎么样？

A1：我们平台做过优化，搭配OPM培养基和补料可以达到原有试剂盒效果，甚至表达量更高。

Q2：有的时候用293顺转出来的重组蛋白活性比较低，是什么原因呢？当然，这是因为蛋白构象不对，但是是什么原因导致构象不对呢？

A2：由于是外源性表达的蛋白，无法避免折叠错配等因素，进而会影响活性。

Q3：抗体轻重链表达，可以在双ORF的一个载体上表达吧，分成两个质粒的意义有多大呢？

A3：在同一个载体上表达量比例一般是1:1。分两个载体可以调整比例，这样减少错配。

Q4：请问同一个分子，CHO-S、CHO-K1、293瞬转糖型修饰差异大吗？

A4：常规情况下都会有差异，差异多大取决于分子本身。

Q5：双抗如何确定转染载体是1个，还是2个还是3个呢？

A5：建议根据抗体的序列，有多少片段以及是否对称进行判断。

Q6：293表达蛋白用什么亚型的细胞比较好？

A6：没有特殊的要求，通常使用293F就可以。

Q7：fortebio怎么测fab端活性呢？

A7：如果是完整抗体，可以用识别Fc端的传感器捕获抗体。靶点蛋白作为分析物。

Q8：如果想大规模测上清中表达量，亲和力，用什么方法呢？

A8：建议使用Fortie方法，简单快捷。

Q9：请问不同的宿主细胞应该从哪些方面考虑去选择适合的培养基？

A9：针对不同宿主，OPM有相对应的培养基，省去您选择的烦恼。登陆OPM官网，在“商品化培养基”页面底部，选择相应的细胞株，我们会为您推荐最合适的培养基产品。

Q10：抗原蛋白表达选择哪种细胞较好？为什么？

A10：通常建议HEK293细胞，转染效率高，可以快速增殖以及高密度培养。

Q11：CHO-K1瞬转表达普遍产量可以达到多少？

A11：常规抗体通常能到几百mg/L。抗原或重组蛋白会低一些。

Q12：CHO-K1瞬转表达是否添加补料，加什么？

A12：需要加补料。添加的是OPM的CHO细胞瞬转补料（OPM-CHO ProFeed）以及葡萄糖。

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