细菌内毒素供试品阳性配制

天气好时

换配制方法需要重新做干扰试验再确认吗？

目前是用配制好的供试品溶液直接稀释10EU/ml的工作标准品得到2入，若想换成4入内毒素+2倍供试品溶液的配制方法，需要做些什么吗？直接换行不行啊？

胡1382c536

我理解 你是在做方法学的时候， 细菌内毒素标准品就没有用细菌内毒素检查用水溶而是用供试品溶液溶的，你这么做本身就是有缺陷的，你们方法学没有人审核吗?
再说你说的这个问题，明显是不行的，因为你本身的方法学就不对！
细菌内毒素标准品需要用细菌内毒素检查用水溶解，然后做预干扰试验，干扰试验，在做试验，这才是方法学的正确步骤。

JarvanWL

两种稀释方法存在一定差异，尤其是使用Mg2+溶液或tris缓冲液作为稀释剂的情况下，直接用4λ+2c的方法稀释，如果使用的标准品是用水作为稀释剂，会降低Mg2+或tris的浓度。而且，药典原文也是用供试品溶液作为稀释剂得到2λ+c溶液，前者更贴近药典方法学试验描述，为啥要换成4λ+2c的稀释方式，不理解。

天气好时

胡1382c536 发表于 2023-7-5 08:24
我理解 你是在做方法学的时候， 细菌内毒素标准品就没有用细菌内毒素检查用水溶而是用供试品溶液溶的，你这 ...

不是，内毒素标准溶液是用检查用水复溶后的，我是说用配制好的供试品溶液和已完成复溶的内毒素标准溶液（10EUIml）稀释制成2入

天气好时

JarvanWL 发表于 2023-7-5 09:35
两种稀释方法存在一定差异，尤其是使用Mg2+溶液或tris缓冲液作为稀释剂的情况下，直接用4λ+2c的方法稀释， ...

我看2019年版中国药品检验操作规范里有两种方法配制，然后直接用复溶后的内毒素标准溶液加供试品溶液配制成供试品阳性时，若是每次实验做的批次比较多，就需要更多的工作标准品，又要漩涡15min，感觉有点麻烦。另一种方法就不会有这种问题。

JarvanWL

天气好时 发表于 2023-7-5 10:20
我看2019年版中国药品检验操作规范里有两种方法配制，然后直接用复溶后的内毒素标准溶液加供试品溶液配制 ...

如果样品无干扰，用水作为稀释剂，两种稀释方法实际是一样的，可以直接换；但是如果有干扰，建议重新做方法学，两种方法本质上不一样。

天气好时

JarvanWL 发表于 2023-7-5 10:30
如果样品无干扰，用水作为稀释剂，两种稀释方法实际是一样的，可以直接换；但是如果有干扰，建议重新做方 ...

也就是说我可以先试用另一种方法，如果所得的结果没有出现干扰，就可以直接换，不用做干扰试验了是吗？

18987850295

我是药检小白，今天我也是没看懂这两个方法，为什么要用2mvd 浓度去稀释4入的标准溶液，求各位老师赐教，不胜感激！

阿西达卡

JarvanWL 发表于 2023-7-5 09:35
两种稀释方法存在一定差异，尤其是使用Mg2+溶液或tris缓冲液作为稀释剂的情况下，直接用4λ+2c的方法稀释， ...

工作标准品开始得用检查用水稀释到1ml，然后用样品稀释这个标准品的话样品浓度是不是变低了

JarvanWL

阿西达卡 发表于 2023-7-14 16:23
工作标准品开始得用检查用水稀释到1ml，然后用样品稀释这个标准品的话样品浓度是不是变低了

凝胶法属于半定量而非定量，本身精确性是有限的，用供试品稀释工作标准品到2λ，假设工作标准品为10EU/ml，稀释到0.25EU/ml，稀释了40倍，粗算供试品浓度从1降到0.975，对于半定量而言，可以忽略。在方法验证时，还要继续稀释到λ、0.5λ、0.25λ，供试品浓度更加接近于1。

阿西达卡

JarvanWL 发表于 2023-7-17 11:37
凝胶法属于半定量而非定量，本身精确性是有限的，用供试品稀释工作标准品到2λ，假设工作标准品为10EU/ml ...

谢谢您的解答，明白了