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在做实验之前我们先来了解下,为什么需要培养细胞? 细胞培养是细胞和分子生物学中使用的重要工具之一,细胞培养的优点是可以使用同批次的细胞,这样能够使我们的实验结果可靠性高可重复性强等优点。研究细胞的生理学、生物化学、药物和有毒物对这些细胞的影响变化。这些数据可以帮助我们用于药物筛选和开发,以及生物化合物的生产。 什么是细胞培养? 细胞培养是指从动物或植物中提取细胞,创造环境的中生长。细胞可以在培养前直接从组织中取出并通过酶或机械手段分解,或者来自已经建立的细胞系或细胞株。 一、细胞培养需要注意的操作事项如下: 1、细胞培养瓶均匀排列可以避免拥挤,并能够保持空气的自由流动,这些有助于维持温度、湿度和适当的气体交换。哺乳动物细胞的培养条件为37℃、 5-7%二氧化碳和高湿度。 2、请勿将培养板堆叠过高,会引起倒塌现象的出现并导致培养板无法充分的交换气体。 3、注意有些组分在室温下放置或长时间光照后会发生降解现象,若将培养基保存于玻璃门冰箱或室温中请使用锡纸包裹瓶身或将其存放在盒子中。 4、预热至37℃的试剂或者从4℃取出后直接使用的试剂,水浴时则需要将瓶身直立使瓶颈露出水面。放在水浴中切勿过长时间,过度的升温会使L-谷氨酰胺降解导致胰蛋白酶溶液的活性损失。 5、转移细胞时需要小心,避免培养基溅出导致污染。如果使用的是不透气的培养瓶,在培养箱取出前必须拧紧瓶盖。每天在显微镜下观察培养的细胞,检查细胞的健康和生长并查看是否有污染。 6水浴时请勿将瓶完全放入水中,否则将会增加污染风险。 7离心细胞祛除含有DMSO的冻存培养基,不同细胞的离心转速和时间可能不同,按照说明书操作。 8某些细胞系可能不需要离心,该步骤按照说明书来确定。 9有时需要通过细胞计数来确定所需使用的培养瓶数量和培养基体积 二、细胞培养污染防护如下: 1、个人防护、培养基或试剂使用前需要查看相应的。用乙醇清洗双手,祛除死皮,死皮肤细胞是潜在的一种污染源,乙醇可以杀死引起培养污染的微生物。 2、保持培养基和试剂与无菌物体接触,使用无菌培养基试剂等物品可以避免培养细胞污染的事项之一。 3、添加氨基酸时操作移液时应尽量避免触碰未经灭菌的物品特别是外部物品,移液管使用后需要丢弃或清洗干净,重复使用移液管会增加污染物传播风险。 4、细胞传代或跟换培养基时需要在无菌的环境下打开容器,不要在敞开容器上方交叉手臂或其他物品,完成试验后,确保所有物品都被盖紧后再从超净台中取出,任何在无菌环境外打开的物品都不可用于细胞培养。
细胞培养的成败很大程度取决于能否让细胞免于微生物的污染,无菌环境是非常重要的。
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