周一周一精神归西

污污 · 发表于 2024-1-25 14:22:33

非内源性病毒的测定应包括体内和体外接种试验，并根据该细胞系的传代史进行其他特异性试验，包括相应的物种特异性试验如小鼠抗体产生试验(MAP)，用以测定可能污染的病毒。

污污 · 发表于 2024-1-25 14:23:18

作为药物生产起始细胞基质的工作细胞库，必须进行外源病毒检测，既可对WCB进行直接测定，也可对从WCB来源的体外传代限度内的细胞进行分析。当对MCB已进行过相应的非内源性病毒测试，并且对已达到或超过细胞传代限度的WCB来源的细胞进行过外源病毒的测试，则不必再对原有的WCB作类似的试验。WCB一般不须作抗体产生试验。另外，不检测MCB，而对WCB进行全面检测来作为替代手段也是可以的。

Erii · 发表于 2024-1-25 14:23:34

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污污 · 发表于 2024-1-25 14:23:53

用于生产的体外细胞传代限度应根据在试生产或商业化生产条件下达到或超过设定的体外传代限度的生产细胞的数据而定。

污污 · 发表于 2024-1-25 14:25:08

一般说来，生产细胞是通过扩增WCB获得的，MCB也可直接用于制备生产细胞。有些内源性病毒可能在MCB和WCB阶段没有被检测出，应对达到体外细胞传代限次的细胞的内源性病毒作出评价。对达到体外细胞传代限次细胞至少应进行一次适当的试验(如体内和体外试验)，以进一步确保生产过程未受外源病毒的污染。如果此时测出有外源病毒污染，应对工艺流程作仔细检查以查明污染原因。若有必要，应对工艺全部重新设计。

Erii · 发表于 2024-1-25 14:26:33

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污污 · 发表于 2024-1-25 14:26:57

对内源病毒和外源病毒的检测方法很多。表2列举了一些检测方法。这些方法可作为目前推荐的基本方法，但不是包罗万象，也不是固定不变的。由于大部分适用的方法会随科学的发展而变化，因此只要有充分的资料支持，采用其他方法也是可接受的。欢迎生产商与管理部门讨论这些可替代性方法。对个别特殊情况，可能需要作其他试验。应设相应的对照试验，以确保试验具有充分的敏感性和特异性。当细胞的种系提示有较大可能存在某种病毒时，需进行专门试验和/或处理。如供生产用的细胞为人或非人灵长目细胞系，除有可接受理由外，还应进行如引起免疫缺陷性疾病和肝炎的人源病毒测试。聚合酶链式反应(PCR)可用于检测这些人源病毒和其他特殊病毒的核酸序列。生产商应按以下提出的一般框架和理论背景证明其所做工作的合理性。

污污 · 发表于 2024-1-25 14:27:53

对于MCB和培养达到或超过生产限度代次的体外细胞，应进行转录病毒测试，包括对敏感细胞培养的感染性测定和电镜(EM)检查。如果没有检测到病毒感染，EM没有发现逆转录病毒或逆转录病毒样颗粒，应测定反转录酶(RT)，或采用其他适当的方法，测定有无非感染性的逆转录病毒。至于转导研究(induction study)，目前尚未发现对此有何应用价值。

Erii · 发表于 2024-1-25 14:27:54

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污污 · 发表于 2024-1-25 14:28:33

进行体外检测时，应将被测试样品(见表2)接种到多种敏感的细胞培养物中，以确保能较为广泛的检测到人和有关动物的病毒。测试中所用指示细胞需根据待试细胞库的物种来源而定，但必须包括一种对人病毒敏感的人和/或非人灵长目动物细胞系。测试的种类和待测的样本应根据细胞的来源或细胞操作情况中可能存在的病毒类型而定。细胞致病病毒和红细胞吸附病毒应予以检测。

污污 · 发表于 2024-1-25 14:29:54

将被测试样品(见表2)接种到哺乳期小鼠和成年小鼠以及鸡胚中，以检测细胞培养物中不能生长的病毒。除以上试验动物物种外，根据细胞系性质和来源，还可使用其他动物物种进行测试。应对受试动物的健康情况进行监测，如有异常应进行调查以确定病因。

污污 · 发表于 2024-1-25 14:30:26

对于啮齿类动物细胞系中的物种特异性病毒的检测，可将被测试样品(见表2)接种到无病毒的动物中去，经一段特定时间后测定其血清抗体水平或酶活性。这种试验包括:小鼠抗体产生试验(MAP)、大鼠抗体产生试验(RAP)和仓鼠抗体产生试验(HAP)。目前，有关用抗体产生试验筛查出的病毒见表3

污污 · 发表于 2024-1-25 14:30:50

人们认识到，用于生产的某些细胞系含有内源性逆转录病毒及其他病毒或病毒序列。为此，本文件第V节介绍了生产行动计划。对于含有内源性逆转录病毒以外的病毒的细胞系能否用于生产问题，应由管理部门根据产品的收益、产品的临床使用用途、污染病毒的性质、感染或致病的潜在可能性、产品的纯化工艺(如对病毒清除的评价资料)及对纯品进行病毒测试的程度，进行利弊分析后综合考虑。

Erii · 发表于 2024-1-25 14:30:50

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污污 · 发表于 2024-1-25 14:31:16

未加工品包括集中回收的一批或多批细胞和培养基。当细胞不易取到(如使用中空纤维或类似装置回收)时，未加工品是发酵罐中收获的液体。在作深加工前，从生产反应罐中获取的一份未加工品的典型样本最适合于检查病毒污染，若有污染，也最有可能被检测出来。因此，除在部分初加工时进行更敏感的病毒测试外(如未加工品在细胞培养物中可能有毒性，而经部分加工后可能就没有毒性了)，应在未加工品阶段进行病毒测试。

污污 · 发表于 2024-1-25 14:32:13

在某些情况下，可对同时含有完整细胞和破碎细胞以及深加工前从反应器中取出的培养上清液的混合物进行测定。在进行上市注册申请时，至少应上报三批试生产或规模化生产的未加工品的研究资料。生产商应制定出对各批产品进行外源病毒现场考核的计划。对于未加工品病毒测试的范围、程度和频度应结合以下几点综合考虑后作出决定:用于生产产品的细胞系性质、细胞系界定过程中病毒检测的结果和广泛性、培养方法、原料来源和病毒消除研究结果等。对未加工品，一般使用一种或几种细胞系进行体外筛查试验。如适用，可使用PCR试验或其他适当的方法。