培养基长菌问题求助

偏锋

各位前辈，之前我在论坛发过贴，我配置的TSA  R2A培养基刚配置完尚未进行实验时，在培养箱中的两天容易长菌。论坛有前辈说过是因为带有加湿功能的培养箱容易长菌。

于是我用先后用酒精对培养基进行消毒后，发现效果不大。又用84消毒一次，然后这一批培养基并没有出现大量长菌的情况。但是我没有对培养箱进行消毒，而是倒了第二批平板继续培养。这一批的平板又出现了长菌的情况。

于是我还有以下疑问：
1、恒温恒湿培养箱需要每次培养完都进行一次消毒灭菌吗？
2、倒完的平板是否需要进行紫外杀菌后再放入培养箱培养？
3、倒完的平板（刚倒完且尚未采样）在培养箱中培养的两天，也需要将平板导致培养嘛？（我之前一直默认刚倒完的平板是正着培养，采样完的平板倒扣培养）

感谢各位前辈答疑

雨过天晴123

刚配置好的平板培养基是需要预培养的。而且是倒置培养。你要看看是不是你的灭菌温度时间不对呀，正常是没有做实验的培养基很少会长菌的。

西早

没看到你之前的的帖子，有没有考虑用呼吸袋包装平皿培养观察看看，先找出污染源在哪。如果包装呼吸袋培养还是长菌，那就不是培养的问题；如果包装呼吸袋没长，可以换培养箱或者对培养箱进行彻底的清洁消毒，看能否解决问题。

156067

你应该要对培养箱和培养箱所在的房间消毒。对培养基消毒是治标不治本，而且讲不通逻辑。

1、一般只针对培养期间长菌了，才会对培养箱消毒，一般培养箱自带紫外灯的吧。或者你讲究点就是每次都消毒。
2、没见过这么操作的，一般无菌操作，培养基和培养皿是灭菌的。不会长菌。而且这么操作是在否定你的无菌操作和灭菌程序吗？
3. 取样完是倒置，取样前预培养也是倒置，一般培养基无特殊说明就都是倒置，默认倒平皿等完全凝固后，直接倒置。

hyh200778

看起来就是操作有问题，或者在无菌环境中操作。

举个栗子，别吃

找问题的方法没对，因为如果要确认加湿功能是否可能导致污染的话，就要从加湿这块进行确认，分开两个培养箱，加湿和不加湿，或者关闭加湿功能培养，或者培养基密封培养来判断
1：因为之前从没用过加湿功能的培养箱，普通培养箱下做从没出现过这种问题，也就定期一周消毒液擦拭一次，如果在找问题的的时候判断确实是因为加湿的原因，那单纯开紫外估计意义不大，因为污染源来源至加湿这个过程
2：不需要的，如果操作没问题，不需要照紫外；
3：除了有特殊需求，平板从制备完到采完样培养都是倒置（曾经在一家公司外审的时候有个老师说霉菌的培养基要正置，原因是如果长菌了，倒置培养之后，在打开时会更容易导致孢子扩散到空气中，这个只能说各有道理）

鱼小小

是没有操作前，培养基就长菌了吗，是不是培养基灭菌、平皿灭菌环节出了问题 ，亦或者倒培养基的操作过程出的问题。个人认为与培养箱的关系不大，先排除前两个问题再说

zhjf

进来学习学习

咒逐

你这完全可以走偏差流程，如果不想走流程，那么为了工作顺利开展，也需要做调查。这活儿就大了。鄙人平生也就做过两次，还都是OOS...

先来回答问题，
1，不需要。定期清洁足够，当然前提是分培养箱。如果供试、阳性不分箱，那么最好在发现有长霉菌出孢子时清洁，最常见的就是做D级环监，几乎就是用前清洁、用后清洁。如果没有发现过霉菌孢子，正常长点细菌菌落倒是无妨，通常5天也不会长能飘散的芽孢。
2，不需要。就算长了个别，预培养结束剔掉就行。
3，预培养正置不要倒。倒置地包天有沉降菌到大盖内侧风险，更别说水汽带回琼脂面上。只有培养时候才倒置，在此之前大盖天包地才能有效沉降菌污染。

再来聊聊调查。

第一步，看菌群。
长出来的是否统一（同一种）？是霉菌还是非真菌（有没有菌丝结构）？

不统一、含霉菌，大方向主要是环境污染，优先级超净工作台＞培养箱＞洁净区空调。

统一、霉菌，做超净工作台和培养箱内沉降菌测试，培养箱放4个，分别停留15分钟、30分钟、60分钟。做完之后，调查主要方向可以朝培养基污染走了。

不统一，不含霉菌。调查主要方向可以朝培养基污染靠，特别注意所有过程中的液体，这是最容易发生细菌传递的介质。

统一，不是霉菌。主要考虑灭菌问题。

还有复杂情况再具体问题具体分析-（不是要下班了）

蒲蒲ya

工作台紫外20min
平皿：180℃ 2h 密封 直到转移到工作台旁边才可以开盖取用
培养基：121℃ 30min 拆封口牛皮纸前喷洒酒精，手消，转移至工作台内倒平皿，温度不要过热
待凝固后倒置培养箱培养
这个流程后看看还会不会长

要饭讨生活

进来学习学习

田园小草

没看懂，你怎么用酒精对培养基进行消毒的

耿钦

预培养要倒置培养，不然冷凝水流到培养基上是一定会造成培养基污染的

偏锋

156067 发表于 2024-10-28 14:26
你应该要对培养箱和培养箱所在的房间消毒。对培养基消毒是治标不治本，而且讲不通逻辑。

1、一般只针对 ...

之前已经经过多次验证，确定灭菌时合格的，且操作也是无误的。唯独培养皿放在培养箱中预培养的时候会染菌，所以怀疑是因为培养皿正放导致长菌的。因为之前我一直以为预培养正放，采样后倒放的

156067

偏锋 发表于 2024-10-30 10:56
之前已经经过多次验证，确定灭菌时合格的，且操作也是无误的。唯独培养皿放在培养箱中预培养的时候会染菌 ...

同一批分正放，倒放。对比看下呗

偏锋

举个栗子，别吃 发表于 2024-10-28 15:51
找问题的方法没对，因为如果要确认加湿功能是否可能导致污染的话，就要从加湿这块进行确认，分开两个培养箱 ...

感谢，我之前已经基本确定是培养箱污染了。之前做过验证，同一批培养基一半在培养箱中，另一半置于35℃恒温环境下（空调房），培养箱中的长菌。但是空调房内的平板在第5-7天后也出现长菌情况。
不过我预培养的时候都是正放的。大概是因为这个吧

偏锋

咒逐 发表于 2024-10-28 17:04
你这完全可以走偏差流程，如果不想走流程，那么为了工作顺利开展，也需要做调查。这活儿就大了。鄙人平生也 ...

感谢前辈。刚入职一年多，公司好像没规定偏差处理流程，这块不太懂。

预培养我看有些前辈倒置，有些前辈正放，所以我盲猜，如果培养箱没污染，正放倒放差别不大是嘛。

预培养的应该是霉菌，又菌丝结构，触感软软蓬蓬的。

还有就是培养箱内做沉降菌的问题，我们培养箱在洁净区外。沉降菌取样后拿到洁净区外培养的，是否可能是这一过程导致的污染呀。

偏锋

蒲蒲ya 发表于 2024-10-28 17:37
工作台紫外20min
平皿：180℃ 2h 密封 直到转移到工作台旁边才可以开盖取用
培养基：121℃ 30min 拆封口 ...

前辈， 我们用不锈钢灭菌桶进行灭菌的。想问下干热灭菌后什么时候关闭灭菌桶上的小孔呀。

咒逐

偏锋 发表于 2024-10-30 11:06
感谢前辈。刚入职一年多，公司好像没规定偏差处理流程，这块不太懂。

预培养我看有些前辈倒置，有些前 ...

菌丝蓬松基本可以排除假性菌丝，那种类多吗？只有一种，还是存在几种？

偏差处理不是QC的事，看你们QA走不走偏差，走偏差让他们给流程，如果不走偏差但是你要自己处理，那稍微麻烦点，得继续看你污染的具体情况。

微生物污染虽然多节点、难找、不好重现，但找的过程还是很有趣的，你做久了就会认识你们公司的家养菌群、人员喜欢带的菌群，我以前管微生物实验室还做过收集大家的体表菌群，很好玩。

咒逐

偏锋 发表于 2024-10-30 11:00
感谢，我之前已经基本确定是培养箱污染了。之前做过验证，同一批培养基一半在培养箱中，另一半置于35℃恒 ...

如果你这验证中长的是同一种菌，反而排除了培养箱的嫌疑。不长菌的，你给培养基放干了都不会长，这是基本常识。