支原体检查培养法（药典方法）

呆呆戴

阅读药典方法有一些不明白的点向请教一下各位老师：关于《3301支原体检查法》中的培养法：使用的培养基需要进行灵敏度检查，文中只提到对液体培养基进行，而对于共同使用的半流体或固体培养基并没有要求进行灵敏度检查，这是为何？
以下附上网上查找到的两个点的答案：
①关于支原体检查用培养基液体与流体/半固体培养基的作用 ：

• 液体培养基主要用于检测支原体的生长代谢产物。支原体在液体培养基中生长时，会消耗培养基中的营养成分，导致培养基的pH值发生变化，从而引起颜色变化；
• 半流体培养基主要用于检测支原体的菌落形态。支原体在半流体培养基上生长时，会形成典型的“荷包蛋样”菌落，这些菌落可以通过显微镜观察到。
  

②  为何不对流体/固体培养基进行支原体检查的原因：

• [color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]液体培养基通过颜色变化来指示支原体的存在，这种变化非常敏感，能够快速检测到极低浓度的支原体代谢产物，故需要进行灵敏度检查；
  

[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]

• 半流体或固体培养基主要用于定性检测，通过菌落形态的观察来确认支原体的存在，因此不需要进行灵敏度检查。
  

个人感觉好像还有其他原因，不知道各位大佬有没有补充的点？

J3J

抢个沙发。等等再来

JaguarXF

之前负责支原体检测两法的实验，但对灵敏度一直没有重视，灵敏度检查仅停留在方案阶段，没有实施。但还是回答一下，望能对您有所帮助。
1、我认为药典中的步骤，是先用两种液体培养基，分别对两个标准菌株复苏，盲传两代后，用两种液体培养基做稀释液，倍比稀释。重点来了，然后把稀释液分别上样标准菌株对应的液体培养基和半流体（或固体）培养基，而不是您认为的仅上样液体培养基。我当时的起草方案也是如此，但没有实施，不能确定半流体培养基实际培养效果，能否满足药典灵敏度要求标准。
2、对于第一条，您可能会说药典已明确接种液体培养基，没有提半流体的事情。对于此，我认为首先“支原体培养法”这一段的药典内容，可谓是乱七八糟，十分拗口，我一直诟病这一段其行文风格。因此我怀疑编写老师可能是漏写了半流体培养基，或者说他认为他写出来半流体培养基，然后我们才疏学浅，没有get到他老人家的写出来了。其次，对于模棱两可的东西，面对监管，我一般会采取往严了做，宁可多做，不少做，再说灵敏度检查的频率也不高。
3、以上是我的结论，即液体和半流体都要做灵敏度实验。
4、再为您扩展几份资料，您可关注“北京三药”公众号，搜索“支原体培养基的灵敏度检査及供试品检查”文章，分为上下两篇，里边提到也是用液体和半流体两种培养基做灵敏度，北京三药作为中检院下属企业，文章具有参考性。另外，您也可关注“青岛海博”官网，搜素其对支原体实验的见解，很有参考意义。
5、再者，您可以联系你们用的培养基供应商，咨询。

机智鼠

在《3301支原体检查法》中，对于液体培养基要求进行灵敏度检查，而半流体或固体培养基未作此要求，主要基于两者检测原理及目的的差异。

液体培养基通过支原体生长代谢导致pH变化，引起颜色改变来检测，这种基于代谢产物的检测方式需确保能灵敏捕捉到极低浓度支原体，故需灵敏度检查，以验证培养基在该方面的能力，参考《中国药典》相关章节对培养基质量把控的要求。

半流体或固体培养基侧重于通过菌落形态等定性特征来判断支原体是否存在，其判断依据相对直观，不以敏感检测极低浓度为目标，所以无需像液体培养基那样专门进行灵敏度检查。但实际操作中，仍需保证培养基整体质量符合检测要求，以确保结果准确性。

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