【信息分享】（转）如何把细胞养的更漂亮！！！

zdlxcb

养了很久的细胞，有一些经验和体会总结一下，和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态更好更漂亮。
1.不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。
这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。
有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。
2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：
首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）
其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。呵呵。)
如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。这个是我师兄发明的，谢谢他了。这个方法真的很好用！
3.关于培养瓶内加入培养基的量的问题。
这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。（可能也是竞争很大，有优胜劣汰吧。呵呵。）对于生长速度快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握。
4.关于选择培养瓶的问题。
个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。而对于同一种细胞，在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对“更安逸”的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。
所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，塑料瓶比玻璃瓶会好，对于生长速度慢的细胞，玻璃瓶则会更好。同样，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候，塑料瓶会好一点，比如刚刚复苏的时候，或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。

zdlxcb

呵呵，如果大家觉得文章好就送点钱给我啊，总觉得钱不够用

wadyc

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youngzhou

支持。     

秋天的风

谢谢

longstory

非常好，都是经验之谈。其中筛选细胞的方法俺也用过，大差不差的。其实细胞培养经验的东西很多，需要自己慢慢摸索，慢慢体会。

zdlxcb

zdlxcb 发表于 2012-12-15 18:55
呵呵，如果大家觉得文章好就送点钱给我啊，总觉得钱不够用

俺也不是很清楚，估计只有版主才可以的哦

仲夏秋夜云

zdlxcb 发表于 2012-12-15 18:55
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估计你参加完这次活动就有很多积分了……

仲夏秋夜云

我喜欢这个内容。其实养细胞这方面，每个人都是凭经验的，教科书不管用

zdlxcb

仲夏秋夜云 发表于 2012-12-16 17:27
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希望如你所说哦，现在一直升不上去，每天早早就来挣钱也挺辛苦的

仲夏秋夜云

zdlxcb 发表于 2012-12-16 22:17
希望如你所说哦，现在一直升不上去，每天早早就来挣钱也挺辛苦的

很快很快的，你可以帮忙再写几篇金牌文件啊，每写一篇都有奖励，现在就缺生物类的人才~

恒立国际-杨生

谢谢分享，支持一下

仲夏秋夜云

恒立国际-杨生 发表于 2012-12-17 10:26
谢谢分享，支持一下

用实际行动支持吧，杨哥~参加活动呗。

仲夏秋夜云

今天评分额度已经用完，明天继续……

dasheng1980

支持一下！学习一下！

xudan.0520

不错，我要分享给我的同事

manu00

每个细胞都是一个生命，养细胞的过程也是个生命发育的过程。每类细胞，每个细胞都有很大的差异。细胞的种类、使用的培养液、不同的细胞分离液、细胞分离时离心机的升降参数、添加的细胞裂解液、细胞累积物的浓度控制、细胞培养方式，整个细胞培养过程中，其受到的影响因素太多了。只能说，不同的人具有不同的培养经验。只能说养细胞的人一定要有人文关怀的精神，保持对生命的尊重。

zhuzhuwinner

非常好，都是经验之谈。其中筛选细胞的方法俺也用过，大差不差的。其实细胞培养经验的东西很多，需要自己慢慢摸索，慢慢体会。

初学者坚持住

感谢，今年刚实习，完全不清楚