微生物实验结果分析

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 08:51:34

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老师们，大家好，最近有个实验结果请老师帮我分析一下：我们的单件产品进行了四次洗脱，然后洗脱液薄膜过滤，第一次到第四次的长菌情况是，第一遍无，第二遍2个，第三遍4个，第四次无，阴性对照无，单从这个实验结果来看产品生物负载可能较低，不适用重复洗脱的方法测定回收率，但是还做了一组单个产品直接覆盖在琼脂平板上，第二天已经有60cfu了，请问各位老师这种结果怎么分析呢，是因为洗脱不出来吗？要说生物负载低，没有洗脱直接覆盖在平板上的也涨了不少菌啊，这可怎么判断？求解答 PS:每一遍的洗脱方法是将产品完全浸泡在蛋白胨缓冲液里旋涡混合5min，静置5min如此重复三遍，每次洗脱总计旋涡15min，静置浸提15min

LaI婷1 · 发表于 2020-7-9 11:19:10

四次的洗脱每一遍都做了5个平行了吗？另外样品也应该取样3组做重复实验，要有大量的数据支持才能更好地分析原因。

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 13:05:19

LaI婷1 发表于 2020-7-9 11:19
四次的洗脱每一遍都做了5个平行了吗？另外样品也应该取样3组做重复实验，要有大量的数据支持才能更好地分析 ...

做了老师，结果是一样的

七月小生 · 发表于 2020-7-9 13:09:44

你洗脱的样品是是蛋白类的还是其他，能简单描述一下吗？

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 13:14:31

七月小生发表于 2020-7-9 13:09
你洗脱的样品是是蛋白类的还是其他，能简单描述一下吗？

对的蛋白类的，一部分是类似胶原蛋白，一部分是聚乳酸，合成的产品

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 13:15:20

七月小生发表于 2020-7-9 13:09
你洗脱的样品是是蛋白类的还是其他，能简单描述一下吗？

老师这样的产品这样洗脱是不是不行

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 13:36:36

七月小生发表于 2020-7-9 13:09
你洗脱的样品是是蛋白类的还是其他，能简单描述一下吗？

老师感觉您一下子说到点上了，我不是很懂材料这块怎么洗脱，很急

七月小生 · 发表于 2020-7-9 14:17:02

首先我解释一下：你的样品原件直接放在琼脂培养基上面，由于你的样品本身就能给提供营养物质，菌落在上面，再提供适宜的生长温度、湿度，菌菌是非常喜欢在上面增长的（增菌）；
其次:考虑你的样品可不可以剪碎，剪碎后再用震荡洗脱的方式试一下，看看回收率怎么样！

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 15:29:44

七月小生发表于 2020-7-9 14:17
首先我解释一下：你的样品原件直接放在琼脂培养基上面，由于你的样品本身就能给提供营养物质，菌落在上面， ...

上面的结果就是剪碎的忘了说了，之前没做剪碎的基本上只有一两个，现在是三四个，打算再多点振荡摇晃振动再试一试，如果是这个原因的，那可能直接放在生物浮在上面的结果不那么具有参考价值

七月小生 · 发表于 2020-7-9 16:06:50

我不清楚你的产品最终的用途是干嘛的，比如他是植入性的，您有没有想过你的样品真是注入到身体里面，微生物也是会滋生的（增菌）的，风险是不是有点大；并且如果做回收实验的话，你加的菌可能会被你的样品粘附，很难洗脱下来回收率达不到30%；外敷的话可能还可以

迷之久远 · 发表于 2020-7-9 16:19:16

如果样品直接琼脂覆盖能生长出菌，并且数量不少，说明产品不适用薄膜过滤法。可以采用直接法进行检测。医疗器械可以依据中国药典或19973的要求，使用直接法进行微生物计数。同时你们可以尝试做一次，直接法的方法学验证，增加一个洗脱+琼脂覆盖组，使用TSA和SDA两种培养基，用以证实，直接法所长的菌落数与产品实际污染菌数是一致的。

迷之久远 · 发表于 2020-7-9 16:20:42

另外可以考虑使用吐温80或其他适宜的液体，配制洗脱液，看有没有改善。

被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 16:36:51

七月小生发表于 2020-07-09 16:06
我不清楚你的产品最终的用途是干嘛的，比如他是植入性的，您有没有想过你的样品真是注入到身体里面，微生物也是会滋生的（增菌）的，风险是不是有点大；并且如果做回收实验的话，你加的菌可能会被你的样品粘附，很难洗脱下来回收率达不到30%；外敷的话可能还可以

是植入性的，灭菌验证做完，无菌包装的肯定都要拿去做生物学评价的，就是不理解这种为什么这么难以洗脱

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被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-9 16:38:54

迷之久远发表于 2020-07-09 16:19
如果样品直接琼脂覆盖能生长出菌，并且数量不少，说明产品不适用薄膜过滤法。可以采用直接法进行检测。医疗器械可以依据中国药典或19973的要求，使用直接法进行微生物计数。同时你们可以尝试做一次，直接法的方法学验证，增加一个洗脱+琼脂覆盖组，使用TSA和SDA两种培养基，用以证实，直接法所长的菌落数与产品实际污染菌数是一致的。

老师我在看19973，产品接种法有个回收率方法学验证，不是很能看得懂，您说的这种验证方法可以详细的给我解释一下吗，谢谢老师辛苦老师了

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被帅与丑交错一 · 发表于 2020-7-10 16:29:45

迷之久远发表于 2020-7-9 16:20
另外可以考虑使用吐温80或其他适宜的液体，配制洗脱液，看有没有改善。

老师产品接种法有没有一个完整的验证方案可以给我参考学习一下的，想看看人家的细节

迷之久远 · 发表于 2020-7-13 11:06:16

被帅与丑交错一发表于 2020-7-10 16:29
老师产品接种法有没有一个完整的验证方案可以给我参考学习一下的，想看看人家的细节

验证方案不写这么详细，百度一份敷贴类的方案吧，都不会写太细

小金库 · 发表于 2023-4-15 22:53:57

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