紫外分光光度法

鱼儿12 · 发表于 2021-6-1 15:04:06

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最近在开发方法，用比色法定量中药复方中的总皂苷，用的是菝葜皂苷元，香草醛冰醋酸和高氯酸显色法，但样品的光谱和标品总是不一致，查文献说是最大吸收波长相差±2nm，请大神帮我分析一下是什么原因？黑色曲线是标品

鱼儿12 · 发表于 2021-6-10 11:19:59

歪把子发表于 2021-6-5 23:34
岛津单机版，UV-2600？

1号峰是目标吸收峰？

只有您回复我

是岛津UV-1800
1号峰是目标峰，对水确实很敏感
问题现在已经解决了，过树脂柱的时候把上一种洗脱溶剂全部置换成纯甲醇或乙醇再收集，然后显色完之后多放置一会儿，出来的图谱与标样几乎完全对上了。

歪说歪有李 · 发表于 2021-6-5 23:34:55

岛津单机版，UV-2600？

1号峰是目标吸收峰？

衍生化反应最大吸收样本和标可能会有差异。

另外值这个反应可能对水敏感？

歪说歪有李 · 发表于 2021-6-10 11:35:31

鱼儿12 发表于 2021-6-10 11:19
只有您回复我
是岛津UV-1800
1号峰是目标峰，对水确实很敏感

溶剂干扰问题啊，方法的详细步骤若提供更容易判断一点，这就是AD结果

鱼儿12 · 发表于 2021-6-11 16:16:49

歪把子发表于 2021-6-10 11:35
溶剂干扰问题啊，方法的详细步骤若提供更容易判断一点，这就是AD结果

样品加80%甲醇超声提取50min（控温50℃），蒸干溶剂后纯水定容至10ml，上样过柱，依次用水—20%甲醇—甲醇洗脱，收集纯甲醇洗脱液。然后显色15min（沸水浴）。
目前还在考察显色剂的种类用量之类的，但发现了新的问题，就是样品平行特别不好，比如0.418和0.360这样的。。。好忧愁_