【珐成浩鑫杯】多糖蛋白结合疫苗制备与质量控制

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多糖蛋白结合疫苗是细菌性疫苗的一种。细菌性疫苗主要分为减毒活疫苗、类毒素疫苗、多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗，其中多糖蛋白结合疫苗是指采用化学的方法将具有载体效应的蛋白质分子与荚膜多糖通过共价结合方式连接起来所制成的耦联疫苗。

多糖蛋白结合疫苗生产工艺流程基本包括菌种培养、发酵、收获、杀菌、纯化、脱毒、蛋白结合、半成品配制和灌装等工序。

多糖蛋白结合疫苗菌种培养，菌种培养是指工作种子批菌种经过复苏、传代扩增至规定代次和规模的过程。菌种培养获得生产用种子用于大罐（发酵）培养。

多糖蛋白结合疫苗菌种培养应对培养控制温度、培养时间、二氧化碳浓度等参数进行控制，液体培养的应考虑搅拌及通气。

多糖蛋白结合疫苗大罐（发酵）培养，大罐（发酵）培养指生产用种子按规定的比例接种至大罐培养基，采用合适的培养条件进行发酵培养的过程。在大罐（发酵）培养过程中应取样进行纯菌检查或染色镜检，以保证没有杂菌污染。

多糖蛋白结合疫苗大罐（发酵）培养应对培养过程中的溶氧量、pH值、温度、搅拌速度和通气量等参数进行控制；培养过程中细菌浓度、抗原滴度、血凝滴度、絮状单位的检测和确认；培养物杀菌温度、时间、搅拌速度、杀菌剂浓度的控制和确认；发酵结束后发酵罐的清洗、消毒的验证及确认等。

多糖抗原制备包括杀菌与多糖收获、多糖纯化两个步骤。

杀菌与多糖收获，大罐培养结束后进行杀菌，一般采用甲醛杀菌，如伤寒沙门氏菌、脑膜炎球菌以及b型流感嗜血杆菌；也可采用脱氧胆酸钠溶液或冷酚溶液进行杀菌，如肺炎球菌。杀菌后，采用离心法或其他合适方法去除菌体，收集上清液提取多糖。培养终点时间、细菌浓度、pH值等进行控制；杀菌温度、时间、搅拌速度的控制。

多糖纯化，多糖纯化包括多糖粗制和多糖精制过程。多糖粗制如采用离心工艺应对离心转速、时间、介质梯度范围和温度等关键参数进行控制；多糖精制，如采用柱层析工艺应对层析介质、缓冲液离子强度（盐浓度）和pH值、流速及压力、平衡体积、上样量、收样范围等进行控制。

载体蛋白制备，用于结合疫苗的载体蛋白，目前已知的有破伤风类毒素TT、白喉类毒素DT、无毒的白喉突变株毒素CRM197、B群脑膜炎球菌外膜蛋白复合物OMP等。载体蛋白制备纯化过程关键工艺参数的控制，柱层析工艺应对层析介质、缓冲液离子强度（盐浓度）和pH值、流速及压力、平衡体积、上样量、收样范围等进行控制。

结合物制备，多糖抗原与载体蛋白之间的结合是利用多糖和蛋白分子中存在的羧基、半缩醛、氨基/亚氨基、巯基/二硫键、羟基等功能键，通过共价结合完成的。目前常见的方法是溴化氰（CNBr）活化法和还原氨基化法等方法。多糖抗原与载体蛋白的结合反应结束后，将结合反应混合物用适宜的液体透析或超滤透析，即获得多糖蛋白结合物。采用透析或超滤工艺去除多糖衍生物、蛋白衍生物中残留的化学试剂应进行验证。

结合物纯化与原液制备，其关键质量参数多糖含量、多糖与蛋白质比值、高分子结合物含量或游离多糖含量、细菌内毒素含量、化学试剂残留量要进行控制。

多糖蛋白结合疫苗半成品配制，半成品配制包括加入原液、辅料、混合均一、除菌过滤等步骤。多糖蛋白结合疫苗半成品配制主要控制原液及各种辅助成分的加入量、各组分的加入顺序、搅拌转速、搅拌时间等。

半成品的灌封、轧盖，对时间进行控制。

灯检，对人员视力、灯检等照度、背景进行控制，如采用自动灯检机，应对灯检机不合格品检出能力进行确认。

对有冷链要求的产品，应对脱冷链时间进行控制。

多糖蛋白结合疫苗生产工艺及过程控制相比于其他细菌性疫苗较为复杂，但不管有多复杂，只要对其工艺过程有充分的认识，把握其工艺过程的每一关键操作步骤，关键操作参数、关键控制项目及控制指标，才能在多糖蛋白结合疫苗生产过程中，避免减少次要偏差的发生，杜绝重大偏差的发生，确保多糖蛋白结合疫苗质量安全有效。

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