无菌检查法-倾注法

小星星qp2 · 发表于 2022-7-8 09:47:24

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大家好，最近使用倾注法检测样品的无菌试验，但是样品加入了菌液后，有很多都会出现生长不均匀（或许是我摇不均匀）或者连片生长，如果是霉菌更加是长得恐怖。我都是取的0.1ml（＜100cfu ）菌液进行试验的，那结果很多都不能看出，应该怎么处理好呢

嘀嗒嘀嘀 · 发表于 2022-7-8 15:08:01

无菌检测不是直接接种法和薄膜过滤法吗？怎么还有倾注法啊，哪个法规提到的啊？

猫咪特工 · 发表于 2022-7-8 10:17:13

楼主有图么

13063113060 · 发表于 2022-7-8 11:30:42

不然就吸0.3/0.3/0.4做3个平板

小星星qp2 · 发表于 2022-7-8 14:11:24

13063113060 发表于 2022-7-8 11:30
不然就吸0.3/0.3/0.4做3个平板

这数据是菌液的体积？

小星星qp2 · 发表于 2022-7-8 14:15:10

木木杨1 发表于 2022-7-8 10:17
楼主有图么

发图我要创新帖子

只是很想知道你们如果日常用倾注法做无菌检查法试验会不会出现多不可数这种情况呢？如果我换了薄膜过滤法我也怕情况还是这样

小蔷 · 发表于 2022-7-8 14:16:21

取样之后滴加到平皿的时候不同位置滴啊，加了培养基之后摇匀，我觉得倾注法还是挺方便的。

119423371 · 发表于 2022-7-8 15:16:44

嘀嗒嘀嘀发表于 2022-7-8 15:08
无菌检测不是直接接种法和薄膜过滤法吗？怎么还有倾注法啊，哪个法规提到的啊？

我只会薄膜过滤法，直接接种和倾注法都不会，用的都是一次性的集菌器

小星星qp2 · 发表于 2022-7-8 16:27:11

119423371 发表于 2022-7-8 15:16
我只会薄膜过滤法，直接接种和倾注法都不会，用的都是一次性的集菌器

我们也打算用集菌仪了，还未购买，倾注法人为因素很大影响吧，会使得菌落和培养基不均匀，但是出现大块生长就很影响试验结果，和培养基的灵敏度验证一样。你们用集菌仪按照药典的方法进行操作会不会也有大片菌落的呢？

xbzhang · 发表于 2022-7-8 17:27:16

那肯定是集菌仪好呀，直接接种法因素太多了

lsyt1008 · 发表于 2022-7-9 15:26:06

集菌仪使用的是滤筒，有菌无菌直接看出来了。

迷之久远 · 发表于 2022-7-11 12:58:24

无菌检验是定性检验，你只要知道有菌还是无菌，不需要其他判断。如果你是想做微生物计数，应该使用微生物计数法，而不是无菌检查法。另，无菌检验使用的是直接法、薄膜过滤法或MPN法等，你应该是搞错了。

小星星qp2 · 发表于 2022-7-12 13:44:04

迷之久远发表于 2022-7-11 12:58
无菌检验是定性检验，你只要知道有菌还是无菌，不需要其他判断。如果你是想做微生物计数，应该使用微生物计 ...

是的，因为产品的评判标准公司这边也没搞清楚，我现在已经知道了，谢谢你。

小星星qp2 · 发表于 2022-7-12 14:32:28

迷之久远发表于 2022-7-11 12:58
无菌检验是定性检验，你只要知道有菌还是无菌，不需要其他判断。如果你是想做微生物计数，应该使用微生物计 ...

我还有个疑问，如果我做初始污染菌的检测，但是看过很多对药典的解读方案，都是需要做培养基适应性验证和方法适用性检测的。但是我们的半成品在一条生产链下来有7-8种，那每次都要这样做的话，准备的培养基和试剂都很多，菌液也不能每天频繁制作，消耗太大了。是我的测试方法有问题么？还是说我是否可以参照GB 15979-2002这个标准呢？直接打算把供试液都薄膜过滤后转到TSA、SDA培养，虽然最终结果只求一个数据，但要是结果不理想，细菌还是真菌污染的更大还要针对性去修整工艺，但是我这想法就看不出来，对吧？

小星星qp2 · 发表于 2022-7-12 14:35:34

小蔷发表于 2022-7-8 14:16
取样之后滴加到平皿的时候不同位置滴啊，加了培养基之后摇匀，我觉得倾注法还是挺方便的。

我就是用的倾注法，样品太多了，时间花费太长，很影响试验结果，空气环境污染大不说，倾注后摇匀也很大问题，菌液对照组很多都成团了

迷之久远 · 发表于 2022-7-12 14:43:39

培养基适应性验证和方法适用性检测，是检验材料和方法的验证，培养基适应性通常一批次的培养基做一次，方法适用性不换检验方法不需要再确认/验证或定期做长周期再确认。15979和药典的方法是差不多的，要求也差不多，只是药典的方法更新更繁琐。通常真菌污染对环境、产品的安全性影响大，细菌污染通常比较好解决。

小星星qp2 · 发表于 2022-7-12 16:55:23

迷之久远发表于 2022-7-12 14:43
培养基适应性验证和方法适用性检测，是检验材料和方法的验证，培养基适应性通常一批次的培养基做一次，方法 ...

明白，谢谢

小蔷 · 发表于 2022-7-12 17:16:30

小星星qp2 发表于 2022-7-12 14:35
我就是用的倾注法，样品太多了，时间花费太长，很影响试验结果，空气环境污染大不说，倾注后摇匀也很大问 ...

那就只有用涂布法了，样多的情况还可以提前准备倒好培养皿，不用担心温度过高或凝固的问题。但是你说的环境污染怎么会了，难道不是在生物安全柜里面做吗？

小星星qp2 · 发表于 2022-7-14 14:25:59

小蔷发表于 2022-7-12 17:16
那就只有用涂布法了，样多的情况还可以提前准备倒好培养皿，不用担心温度过高或凝固的问题。但是你说的环 ...

是在生物安全柜里呀，但是作业太久，环境也会慢慢被污染吧？还有我想请教一下，如果是很大的样品不能做破坏性试验，我到底该怎么制备洗脱液呢，又不是密封的就很麻烦，还有盘管类型的，我只有用超声波，特头疼呀

小星星qp2 · 发表于 2022-7-14 14:28:12

迷之久远发表于 2022-7-12 14:43
培养基适应性验证和方法适用性检测，是检验材料和方法的验证，培养基适应性通常一批次的培养基做一次，方法 ...

麻烦再打扰一下，我想请教针对大点的样品，做无菌性检查该怎么制备洗脱液呢？这一点很头疼，而且它也不是密封的

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