纯化水需氧菌总数检测方法

翠ck01g38i · 发表于 2023-3-23 12:53:21

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各位前辈们：

我在做纯化水需氧菌时用这个方案：取工艺用水10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。取10ml供试液加入薄膜过滤器中进行过滤，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗,冲洗量为100ml/膜,共制备2张滤膜。取滤膜，菌面朝上贴于R2A琼脂培养基上，倒置于30～35℃培

养箱中培养5天后进行需氧菌总数的计数。同时做阴性对照试验。这个方法可行吗？怎么平板上一个菌都没有长？领导怀疑方法步骤是错的。。。

yir1g · 发表于 2023-3-23 13:51:12

你这检验量每张膜实际只有1ml，
一般做法是直接10ml 进滤杯，加pH7.0到100ml，过滤，培养。
（你想做多少都行，10ml 20ml，看你水质，控制在一个方便操作，容易计数的量就行，最终报告按/ml 计就好）

而且薄膜过滤法可以不用做平行

有所思CJ · 发表于 2023-3-23 14:25:22

我不理解为什么纯化水检测你们要用pH7.0缓冲液稀释或冲洗，这么做的原因是什么？
我觉得可以直接取1ml过滤，然后贴膜，当然1ml必须盖住滤膜所有面积，否则就增加样品体积。
可能是我想的太少，没发现这么做的问题。

翠ck01g38i · 发表于 2023-3-23 14:44:53

有所思CJ 发表于 2023-3-23 14:25
我不理解为什么纯化水检测你们要用pH7.0缓冲液稀释或冲洗，这么做的原因是什么？
我觉得可以直接取1ml过滤 ...

2020版中国药典通则1105中写道
　　水溶性供试品　取供试品，用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH 7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。所以我是根据药典来的，不知道是不是因为我理解错了药典的意思导致我的方案是不是和药典不一样，所以平板不长？

翠ck01g38i · 发表于 2023-3-23 14:47:10

yir1g 发表于 2023-3-23 13:51
你这检验量每张膜实际只有1ml，
一般做法是直接10ml 进滤杯，加pH7.0到100ml，过滤，培养。
（你想做多少 ...

是不是意味着我的这个步骤不需要“取工艺用水10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。取10ml供试液加入薄膜过滤器中进行过滤，”直接取供试品10ml或者更多体积，然后用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗就好了？

田园小草 · 发表于 2023-3-23 15:52:01

一般纯化水的话，直接10ml，你对自己公司纯化水质量有信心的话就100ml，直接过滤，阴性对照你就可以等量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液直接过滤即可，当然这一切都是建立在验证基础上的，

根本不需要你这么麻烦

阿对对对 · 发表于 2023-3-23 16:22:26

田园小草发表于 2023-3-23 15:52
一般纯化水的话，直接10ml，你对自己公司纯化水质量有信心的话就100ml，直接过滤，阴性对照你就可以等量的p ...

纯化水微生物限度薄膜过滤法需要做哪些确认？

阿对对对 · 发表于 2023-3-23 16:23:08

田园小草发表于 2023-3-23 15:52
一般纯化水的话，直接10ml，你对自己公司纯化水质量有信心的话就100ml，直接过滤，阴性对照你就可以等量的p ...

取完10ml纯化水过滤后，还用冲洗吗？

田园小草 · 发表于 2023-3-23 16:25:06

阿对对对发表于 2023-3-23 16:23
取完10ml纯化水过滤后，还用冲洗吗？

冲洗是有抑菌成分下才需要的操作，一般情况下，能不冲就不冲

田园小草 · 发表于 2023-3-23 16:33:36

阿对对对发表于 2023-3-23 16:22
纯化水微生物限度薄膜过滤法需要做哪些确认？

方法验证啊，虽然是多余的，水没有任何抑菌成分，但对于一个GMP企业来说，QC的任何实验操作（除了那些经典理化实验），建立方法验证方案，是必须的

yir1g · 发表于 2023-3-24 14:59:28

翠ck01g38i 发表于 2023-3-23 14:47
是不是意味着我的这个步骤不需要“取工艺用水10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供 ...

是的。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。

有所思CJ · 发表于 2023-3-24 16:04:58

翠ck01g38i 发表于 2023-3-23 14:44
2020版中国药典通则1105中写道
　　水溶性供试品　取供试品，用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH 7. ...

用缓冲液稀释是针对水溶性固体或液体样品的（固体不能直接过滤需要溶解，有些液体是粘稠的，或者抑菌性太强高浓度直接过滤容易被滤膜吸附留下抑菌性所以需要稀释；或者液体内微生物太多也可以稀释来方便计数。）

你的实验方法只是操作麻烦，但从方法看没什么错误，应该不会引起菌落不长。考虑是不是纯化水本身就比较干净。

翠ck01g38i · 发表于 2023-3-27 16:49:40

有所思CJ 发表于 2023-3-24 16:04
用缓冲液稀释是针对水溶性固体或液体样品的（固体不能直接过滤需要溶解，有些液体是粘稠的，或者抑菌性太 ...

好的，谢谢

翠ck01g38i · 发表于 2023-3-27 16:50:11

yir1g 发表于 2023-3-24 14:59
是的。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。

好的，谢谢

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